Resumo: Etanol de segunda-geração pode ser produzido a partir de resíduos agrícolas tais como bagaço de cana-de-açúcar e palha de milho. Para disponibilizar os açúcares fermentáveis da biomassa lignocelulósica para a fermentação alcoólica é necessário o pré-tratamento seguido da hidrólise enzimática da celulose. Os custos envolvidos com a hidrólise enzimática são elevados e muitas vezes inviabilizam a aplicação em escala industrial. Esse trabalho avaliou o co-cultivo de Aspergillus niger e Ceriporiopsis subvermispora (em fermentação em estado sólido (FES) utilizando bagaço de cana-de-açúcar e palha de milho) para a produção de enzimas lignocelulolíticas e açúcares redutores. O planejamento fatorial 2 2 foi usado e as variáveis analisadas foram o pré-tratamento alcalino e o pré-tratamento microbiológico (co-cultivo), nos níveis máximos (+) e mínimos (-). A metodologia aplicada consistiu na fermentação em estado sólido seguida de determinações das atividades enzimáticas e dos açúcares redutores. Para o bagaço de cana-de-açúcar o co-cultivo não foi favorável para a produção das enzimas FPase (celulases totais) e açúcares redutores, porém foi a condição que mais favoreceu a produção de CMCase (endoglicanases). A melhor condição para a produção de FPase e açúcares redutores foi o mono-cultivo de Aspergillus niger em bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado. Para a palha de milho, a associação do pré-tratamento alcalino com o co-cultivo dos micro-organismos favoreceu a produção de FPase e açúcares redutores. Já a produção de CMCase foi maior nos ensaios nos quais a matéria-prima não foi tratada e ocorreu o co-cultivo. Portanto, para a produção de CMCase, o co-cultivo foi a melhor condição para os dois resíduos agrícolas e dispensa o uso do tratamento químico, diminuindo assim os custos com o processo. Palavras-chave:Aspergillus niger. Ceriporiopsis subvermispora. Co-cultivo. Fermentação em estado sólido. Enzimas lignocelulolíticas. Açúcares fermentáveis.Abstract: Second-generation ethanol can be produced from agricultural waste like sugarcane bagasse and corn stover. Pretreatment followed by enzymatic hydrolysis of cellulose is necessary for fermentable sugars from lignocellulosic biomass to become available. The costs involved in the enzymatic hydrolysis are high and can make the process economically unfeasible. This study evaluated the co-cultivation of Aspergillus niger and Ceriporiopsis subvermispora (in solid state fermentation (SSF) using sugarcane bagasse and corn stover) in producing lignocellulolytic enzymes and reducing sugars. The factorial design 2 2 was used and