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Zusammenfassung: Bis-[2-(succinimidooxycarbonyloxy)äthyl]sulfon [SO 2 (Eoc-ONSu) 2 ] reagiert mit Insulin in IN NaHC0 3 /Dimetbvlformamid in 20-bis 35proz. Ausbeute zuN aAl ,N eB29 -2,2'-Sulfonylbis(äthoxycarbonyl)insulin [S0 2 (Eoc) 2 -Insulin], das durch Verteilungschromatographie gereinigt werden kann. Aufspaltung der Disulfidbrücken und Reoxidation in hoher Verdünnung gibt etwa 60% Insulinaktivität zurück. Die Abspaltung des Vernetzungsreagens gelingt mit 0.5N NaOH bei 0 °C innerhalb weniger Sekunden und führt zu biologisch voll wirksamem Insulin. Summary: Reaction of bis-[2-(succinimidooxycarbonyloxy)ethyl]sulfone[S0 2 (Eoc-ONSu) 2 ]with insulin in IN NaHCO 3 /dimethylformamide forms J /V a!A1 , J /V reB29 -2,2'-sulfonylbis(ethoxycarbonyl)insulin [S0 2 (Eoc) 2 -insulin] in 20 -35% yield. The product can be purified by partition chromatography. After cleavage of the disulfide bridges, reoxidation in very dilute solution reconstitutes about 60% of the original insulin activity. Cleavage of the crosslinking moiety can be achieved with 0.5N NaOH at 0 °C in only a few seconds, rendering a biologically fully active insulin.

Der Methylsulfonylathyloxycarbonyl(Msc-)Rest ' I la& sich spezifisch in die Aminogruppen von A I-Glycin und B29-Lysin des lnsulins einfuhren. Er erhoht die Loslichkeit des lnsulins in polaren Losungsmitteln. Diese Eigenschaft erleichtert die Reinigung von Msc,-Insulin durch Verteilungschromatographie. Die Abspaltung der Schutzgruppen gelingt durch kurzes Einwirken von verd. Natronlauge bei 0°C ohne bedeutende Schadigung des Molekiils. Nach chromatographischer Reinigung ist die Kristallisationsneigung des zuriickgebildeten lnsulins gegeniiber nativem Material nicht verandert. Die biologische Wirkung bleibt voll erhalten. The Methylsulfonylethyloxycnrboayl Residue as a Reversible Amino Protecting Group for IasulinThe methylsulfonylethyloxycarbonyl(Msc) residue is introduced specifically into the amino groups of A 1 glycine and B29 lysine of insulin. It increases the solubility of insulin in polar solvents. This property facilitates the purification of Msc,-insulin by partition chromatography. Deprotection is accomplished by short treatment with dilute NaOH at O' C, without noticable damage of the molecule. Compared with native material, the tendency of the deprotected insulin to crystallize, following chromatographic purification, had not changed. The recovered insulin exhibits full biological activity.Die unterschiedliche Reaktivitat der 3 Aminogruppen des Insulins kommt darin zum Ausdruck, daD Isothiocyanate bevorzugt an der Aminogruppe des B I -Phenylalanins angreifen ' ), wahrend unter geeigneten Bedingungen Reagentien wie ten-Butyloxycarbonyl-azid uberwiegend mit den Aminogruppen von A 1-Glycin und B29-Lysin reagieren4). Als Folge dieses Verhaltens entstand ein Bediirfnis nach siiurestabilen Schutzgruppen, welche im Gegensatz zur Boc-Gruppe beim sukzessiven Abbau der B-Kette nach Edman 5 , stabil bleiben. I ) Abkiirzungen: Msc = Methylsulfonylathyloxycarbonyl-, PIC = Phenylthiocarbamoyl-, Tfa = Trifluoracetyl-. Boc = rerr-Butyloxycarbonyl-, -ONSu = N-Hydroxysuccinimidester.

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