The thrombin-like enzyme from Bothrops barnetti named barnettobin was purified. We report some biochemical features of barnettobin including the complete amino acid sequence that was deduced from the cDNA. Snake venom serine proteases affect several steps of human hemostasis ranging from the blood coagulation cascade to platelet function. Barnettobin is a monomeric glycoprotein of 52 kDa as shown by reducing SDS-PAGE, and contains approx. 52% carbohydrate by mass which could be removed by N-glycosidase. The complete amino acid sequence was deduced from the cDNA sequence. Its sequence contains a single chain of 233 amino acid including three N-glycosylation sites. The sequence exhibits significant homology with those of mammalian serine proteases e.g. thrombin and with homologous TLEs. Its specific coagulant activity was 251.7 NIH thrombin units/mg, releasing fibrinopeptide A from human fibrinogen and showed defibrinogenating effect in mouse. Both coagulant and amidolytic activities were inhibited by PMSF. N-deglycosylation impaired its temperature and pH stability. Its cDNA sequence with 750 bp encodes a protein of 233 residues. Indications that carbohydrate moieties may play a role in the interaction with substrates are presented. Barnettobin is a new defibrinogenating agent which may provide an opportunity for the development of new types of anti-thrombotic drugs.

Objetivos. Desarrollar un protocolo de inmunización para producir inmunoglobulinas Igy de origen aviar contra el veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox y evaluar la capacidad neutralizante. Materiales y métodos. Se inmunizaron seis gallinas de postura de la raza hy line brown con 500 µg/dosis de veneno de B. atrox en un periodo de dos meses. Cada semana, los huevos fueron colectados para el aislamiento de inmunoglobulinas Igy a partir de la yema, usando dos pasos consecutivos con ácido caprílico y sulfato de amonio. La detección de anticuerpos se realizó por inmunodifusión doble mientras que el título y reactividad cruzada se determinaron por las técnicas de ELISA y Western blot. El cálculo de DL 50 y de la DE 50 del antiveneno Igy producido se realizó utilizando el método de Probits. Resultados. La masa de anticuerpos aislados fue de 8,5 ± 1,35 mg de Igy/mL de yema. Asimismo, la DE 50 del antiveneno aviar fue calculada en 575 µL de antiveneno/mg de veneno. Adicionalmente, los ensayos de reactividad cruzada mostraron que el veneno de B. atrox comparte mas epítopes comunes con el veneno de B. brazili (47%) que con otros veneno del mismo género, en tanto que los venenos de Lachesis muta (19%) y Crotalus durissus (12%) mostraron una baja reactividad cruzada. Conclusiones. Se ha obtenido Igy purificada contra el veneno de B. atrox con capacidad neutralizante y se ha demostrado su utilidad como herramienta inmunoanalítica para evaluar la reactividad cruzada con venenos de otras especies.

Objetivos. Desarrollar un protocolo de inmunización para producir inmunoglobulinas Igy de origen aviar contra el veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox y evaluar la capacidad neutralizante. Materiales y métodos. Se inmunizaron seis gallinas de postura de la raza hy line brown con 500 µg/dosis de veneno de B. atrox en un periodo de dos meses. Cada semana, los huevos fueron colectados para el aislamiento de inmunoglobulinas Igy a partir de la yema, usando dos pasos consecutivos con ácido caprílico y sulfato de amonio. La detección de anticuerpos se realizó por inmunodifusión doble mientras que el título y reactividad cruzada se determinaron por las técnicas de ELISA y Western blot. El cálculo de DL 50 y de la DE 50 del antiveneno Igy producido se realizó utilizando el método de Probits. Resultados. La masa de anticuerpos aislados fue de 8,5 ± 1,35 mg de Igy/mL de yema. Asimismo, la DE 50 del antiveneno aviar fue calculada en 575 µL de antiveneno/mg de veneno. Adicionalmente, los ensayos de reactividad cruzada mostraron que el veneno de B. atrox comparte mas epítopes comunes con el veneno de B. brazili (47%) que con otros veneno del mismo género, en tanto que los venenos de Lachesis muta (19%) y Crotalus durissus (12%) mostraron una baja reactividad cruzada. Conclusiones. Se ha obtenido Igy purificada contra el veneno de B. atrox con capacidad neutralizante y se ha demostrado su utilidad como herramienta inmunoanalítica para evaluar la reactividad cruzada con venenos de otras especies. Palabras clave: Venenos de serpiente; Antivenenos; Neutralización; Bothrops atrox (fuente: DeCS BIREME). EXPERIMENTAL EFFICACY OF IgY ANTIBODIES PRODUCED IN EGGS AGAINST THE VENOM OF THE PERUVIAN SNAKE Bothrops atrox ABSTRACT Objectives.To develop an immunization protocol in order to produce avian Igy immunoglobulins against Bothrops atrox Peruvian snake venom and to evaluate its neutralizing capacity. Materials and methods. Six Hy Line Brown hens were immunized each two weeks using 500µg/doses of B. atrox venom in a period of two months. Each week, eggs were collected for Igy isolation from yolk using two consecutive steps with caprilic acid and ammonium sulfate. Detection of Igy anti-B. atrox were performed by double immunodiffusion, whereas title and cross-reactivity were analyzed using ELISA INTRODUCCIÓNEn el Perú, la "jergón" Bothrops atrox es la serpiente responsable de la mayoría de accidentes en la selva, con un 88 a 92% de todos los casos descritos (1) su mordedura desencadena un cuadro clínico muy complejo con efectos locales y sistémicos que se manifiestan mientras no se suministre tratamiento específico.Los efectos letales del veneno y el desequilibrio hemostático producidos, son neutralizados y restablecidos respectivamente por el antiveneno producido en caballos, el cual contiene inmunoglobulinas G. Existe, sin ARTíCULO ORIGINAL

Objetivo. Aislar y caracterizar in silico un transcrito del gen de fosfolipasa A 2 (PLA 2 ) aislado del veneno de Lachesis muta de la Amazonía peruana. Materiales y métodos. Se amplificó el transcrito del gen sPLA 2 mediante la técnica de RT-PCR a partir de RNA total utilizando cebadores específicos, el producto de DNA amplificado se insertó en el vector pGEM para su posterior secuenciación. Mediante análisis bioinformático de la secuencia nucleotídica se determinó un marco de lectura abierta de 414 nucleótidos que codifica 138 aminoácidos, incluyendo16 aminoácidos del péptido señal, el peso molecular y el pI fueron de 13 976 kDa y 5,66 respectivamente. Resultados. La secuencia aminoacídica denominada Lm-PLA 2 -Perú, contiene Asp49, así como Tyr-28, Gly-30, Gly-32, His-48, Tyr52, Asp99 importantes para la actividad enzimática. La comparación de Lm-PLA 2 -Perú con las secuencias aminoacídicas de los bancos de datos mostró 93% de similitud con las sPLA 2 de Lachesis stenophrys y más del 80% con otras sPLA 2 de venenos de la familia Viperidae. El análisis filogenético de la secuencia nucleotídica del transcrito del gen sPLA 2 indica que Lm-PLA 2 -Perú se agrupa con otras sPLA 2 [Asp 49 ] ácidas previamente aisladas del veneno de Bothriechis schlegelii con un 89% de identidad. El modelaje tridimensional de Lm-PLA 2 -Perú, presenta una estructura característica de sPLA 2 del Grupo II formada por tres hélices-α, una lámina-β, una hélice corta y un lazo de unión con calcio. Conclusión. La secuencia nucleotídica corresponde al primer transcripto del gen de PLA 2 clonado a partir del veneno de la serpiente Lachesis muta, que habita en la selva del Perú. Palabras clave: Fosfolipasas A 2 ; Lachesis muta; Venenos de serpiente; Clonación molecular; Biología computacional (fuente: DeCS BIREME). MOLECULAR CLONING AND CHARACTERIZATION IN SILICO OF PHOSPHOLIPASE A 2 TRANSCRIPTO ISOLATED FROM Lachesis muta PERUVIAN SNAKE VENOM ABSTRACTObjective. Isolate and characterize in silico gene phospholipase A 2 (PLA 2 ) isolated from Lachesis muta venom of the Peruvian Amazon. Material and methods. Technique RT-PCR from total RNA was using specific primers, the amplified DNA product was inserted into the pGEM vector for subsequent sequencing. By bioinformatic analysis identified an open reading frame of 414 nucleotides that encoded 138 amino acids including a signal peptide of 16 aminoacids, molecular weight and pI were 13 976 kDa and 5.66 respectively. Results. The aminoacid sequence was called Lm-PLA 2 -Peru, contains an aspartate at position 49, this aminoacid in conjunction with other conserved residues such as Tyr-28, Gly-30, Gly-32, His-48, Tyr52, Asp99 are important for enzymatic activity. The comparison with the amino acid sequence data banks showed of similarity between PLA 2 from Lachesis stenophrys (93%) and other PLA 2 snake venoms and over 80% of other sPLA 2 family Viperidae venoms. A phylogenetic analysis showed that Lm-PLA 2 -Peru grouped with other acidic [Asp 49 ] sPLA 2 previously isolated from Bothriechis schlegel...