RESUMENDebido a la importancia social y económica de las enfermedades gastrointestinales causadas por alimentos contaminados con Salmonella enterica, es necesario contar con sistemas de detección rápidos, sensibles y específicos para la detección oportuna de dicho patógeno. En este trabajo se presenta un protocolo de PCR de punto final para la identificación de S. enterica en leche, que utiliza los pares de iniciadores STM3098-f2/STM3098-r2, STM4057-f/STM4057-r y STM4497-f/STM4497-r previamente validados como específicos del género Salmonella, de la subespecie I y del serotipo Typhimurium, respectivamente. El protocolo presentado permite la detección de 1 UFC/25 ml de leche contaminada artificialmente, con un periodo de pre-enriquecimiento de 12 h, en ensayos de PCR simple y multiplex con los tres pares de iniciadores. El protocolo diseñado puede ser aplicado en sistemas de vigilancia sanitaria para la detección de S. enterica en leche. PALABRAS CLAVE: Salmonella enterica, Leche, PCR multiplex. ABSTRACTGastrointestinal diseases caused by foodstuffs contaminated with Salmonella enterica implicate important social and economic issues, making it necessary to have fast, sensitive, and specific systems for opportune detection of the pathogen. An endpoint PCR protocol for identification of S. enterica in milk is presented using primer pairs previously validated as specific to the genus Salmonella (STM3098-f2/STM3098-r2), subspecies enterica (subspecies I) (STM4057-f/STM4057-r), and serotype Typhimurium (STM4497-f/ STM4497-r). This protocol allowed for detection of 1 CFU/25 mL of spiked milk after a 12 h pre-enrichment period by means of simple and multiplex PCR assay with the three used primer pairs. The designed protocol can be applied in sanitary survey programs for detection of S. enterica in milk.