Septinas são proteínas que ligam GTP e interagem entre si formando heterocomplexos, os quais se organizam em filamentos e estruturas de maior nível de organização. Em humanos são encontrados 13 genes que codificam septinas, as quais se dividem em 4 grupos com base na similaridade de sua organização estrutural. Análises filogenéticas identificaram quatro septinas ortólogas no deuterostômio Ciona intestinalis, as quais apresentam, cada uma, identidade com um dos quatro grupos de septinas de mamíferos. Tais proteínas foram nomeadas CiSEPT2, CiSEPT6, CiSEPT7 e CiSEPT9 devido a identidade com as septinas humanas. Sabe-se que septinas de diferentes grupos interagem entre si formando heterocomplexos e, assim, a possibilidade de formar um oligômero único em C. intestinalis permite um modelo mais simples para o estudo da organização dos filamentos. Análises de bioinformática identificaram nessas proteínas motivos estruturais típicos de septinas, incluindo resíduos conservados para a ligação e hidrólise do GTP. As proteínas foram produzidas de forma heteróloga e a capacidade hidrolítica tanto de CiSEPT2 como de CiSEPT7 foiram confirmadas diretamente. Em contrapartida, CiSEPT6 não apresentou atividade catalítica. Um sistema de coexpressão foi construído no qual as quatro septinas de C. intestinalis foram co-expressas e co-purificadas em diferentes arranjos, resultando na formação de heterocomplexos parciais além daquele contendo as quatro subunidades. A avaliação do estado oligomérico dos heterocomplexos parciais mostrou que estes correspondem majoritariamente a tetrâmeros e hexâmeros quando formados, respectivamente, por duas ou três subunidades. Estes oligômeros foram analisados por microscopia eletrônica de transmissão (MET) em que se observou que os mesmos se dispõem na forma de um bastão. Ensaios ainda mostraram que a polimerização desses oligômeros é dependente de CiSEPT2 sugerindo que esta subunidade esteja possivelmente posicionada na extremidade do heterocomplexo. Adicionalmente, ensaios de polimerização realizados com o complexo CiSEPT2/6/7/9 revelaram que este é capaz de interagir com filamentos adjacentes, possivelmente via coiled-coil, formando estruturas de mais alta ordem, similar aos já observados em S. cerevisiae. Finalmente, experimentos utilizando termoforese em microescala (MST) mostraram uma maior afinidade de interação entre as subunidades quando oligômeros estão envolvidos, indicando que estes podem atuar como fator de nucleação para a formação dos heterocomplexos. Esse trabalho apresenta os primeiros estudos de caracterização das septinas de C. intestinalis mostrando a formação do heterocomplexo e representa um modelo simplificado e viável para estudos estruturais relativos a formação de filamentos de septinas. Assim, através de uma abordagem comparativa com complexos oriundos de outros organismos, este novo complexo poderá contribuir para a compreensão do mecanismo de montagem e controle da polimerização de septinas. Palavras-chave: Septinas. Filamentos. Heterocomplexos. Ciona intestinalis.

AGRADECIMENTOSÀ Deus, pela constante presença em minha vida. À minha orientadora Profª Drª. Ana Paula Ulian Araújo pela orientação, oportunidade de aprendizado e rapidez nas correções.Às técnicas, Bel e Andressa, pela organização e manutenção do laboratório tornando a rotina de trabalho mais fácil. Agradeço em especial à Andressa por toda a ajuda com os protocolos e manuseio de equipamentos ao longo desses dois anos, muito obrigada.Ao grupo de septinólogos pelas discussões e trocas de idéias, especialmente a Drª. Joci Neuby pela ajuda direta na realização deste trabalho.Aos amigos que fiz no grupo de Biofísica, Helô, Raíssa, Heline, Débora e Natália pela descontração tornando o dia-a-dia no laboratório mais prazeroso e pela amizade.Aos meus pais, Mara e Jefferson (in memoriam), por me servirem de exemplo todos os dias; e aos meus irmãos, Jefferson e Aline, por todo o incentivo, suporte e amor incondicional. Vocês são tudo na minha vida! Ao meu então noivo, Altieris, que muitas vezes perdeu as tardes de domingo me acompanhando no laboratório. Amo você!

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