Os objetivos desta pesquisa foram identificar o conhecimento dos agentes comunitários de saúde (ACS) sobre hepatites virais (HV), verificar se palestras aumentam tal conhecimento e investigar se este se relaciona com o tempo de atuação e com capacitações anteriores. Neste estudo transversal, 674 ACS de seis municípios do Estado do Espírito Santo responderam a um questionário sobre HV antes e após palestras relativas ao assunto. As pontuações dos questionários e as proporções de acertos e erros, anteriores e posteriores às palestras, foram comparadas pelos testes de Wilcoxon e McNemar, respectivamente. A associação do conhecimento com o tempo de atuação e com capacitações anteriores foi analisada pelo Mann-Whitney. Adotou-se p < 0,05. Os ACS apresentavam baixo nível de conhecimento sobre as HV antes das palestras, as quais aumentaram o conhecimento destes profissionais. O conhecimento prévio sobre HV não se relacionou com o tempo de atuação, tampouco com capacitações anteriores.