Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh infusa daun gulma siam (Chromolaena odorata) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dan perbedaan yang signifikan antar perlakuan infusa daun gulma siam (Chromolaena odorata) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Penelitian ini menggunakan metode eksperimen dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 6 perlakuan dan 4 kali ulangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa infusa daun gulma siam (Chromolaena odorata) pada konsentrasi 100% memiliki aktivitas tertinggi dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli yaitu sebesar 5,8 mm dan pada bakteri Staphylococcus aureus sebesar 7,48 mm. Dari hasil analisis statistik One Way Anova dengan statistik uji F dengan taraf kepercayaan 5% bahwa terdapat pengaruh infusa daun gulma siam (C. odorata) terhadap pertumbuhan bakteri E.coli dan S. aureus. Setelah dilakukan uji lanjut (Uji Duncan) didapatkan hasil bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antar perlakuan pada masing-masing konsentrasi yang berbeda.