Niemann-Pick disease type C (NP-C) (OMIM#257220) is a rare lysosomal storage disorder caused by pathogenic variants in either the NPC1 or NPC2 genes. It manifests with a wide spectrum of clinical symptoms and variable age of onset. We studied the impact of the frequent polymorphic variant c.2793 C > T (p.Asn931 = ), located in the donor splice site (SS) of NPC1 exon 18 on the penetrance of the rare synonymous variant c.2727 C > T (p.Cys909 = ), identified in two 55 y.o. twins with an adult onset form of NP-C. The patients' diagnosis was supported by biochemical analysis and positive filipin test. Analysis of the patients' cDNA showed that the c.2727 C > T variant leads to cryptic donor SS activation and frameshift deletion in the NPC1 exon 18. However, the minigene assay demonstrated that this exon shortening takes place only in the presence of the frequent polymorphic variant c.2793 C > T. Results of the transcript specific qPCR showed that only the presence in the NPC1 exon 18 of both variants leads to significant decrease of wild type (WT) transcript isoform.

Background Niemann-Pick disease type C (NP-C) is an inherited neurodegenerative disease (1 per 100 000 newborns) caused by NPC proteins impairment that leads to unesterified cholesterol accumulation in late endosomal/lysosomal compartments. To date the NP-C diagnostics is usually based on cholesterol detection in fibroblasts using an invasive and time-consuming Filipin staining and we need more arguments to widely introduce oxysterols as a biomarkers in NP-C. Methods Insofar as NP-C represents about 8% of all infant cholestases, in this prospective observational study we tried to re-assess the specificity plasma oxysterol and chitotriosidase as a biochemical screening markers of NP-C in children with cholestasis syndrome of unknown origin. For 108 patients (aged from 2 weeks to 7 years) the levels of cholestane-3β,5α,6β-triol (C-triol) and chitotriosidase (ChT) were measured. For patients with elevated C-triol and/or ChT the NPC1 and NPC2 genes were Sanger-sequenced and 47 additional genes (from the custom liver damage panel) were NGS-sequenced. Results Increased C-triol level (> 50 ng/ml) was detected in 4 (of 108) infants with cholestasis syndrome of unknown origin, with following molecular genetic NP-C diagnosis for one patient. Plasma cholesterol significantly correlates with C-triol ( p < 0.05). NGS of high C-triol infants identified three patients with mutations in JAG1 (Alagille syndrome) and ABCB11 (Byler disease) genes. Increased ChT activity was detected in 8 (of 108) patients with various aetiologies, including NP-C, Byler disease and biliary atresia. Conclusion Combined analysis of ChT activity and C-triol levels is an effective method for identifying NP-C.

ВведениеБолезнь Ниманна-Пика, тип С (НПС) -редкое прогрессирующее наследственное аутосомно-рецес-сивное заболевание из группы лизосомных болезней накопления. Патогенетические механизмы до настоя-щего времени до конца не выяснены. Болезнь НПС -мультисистемная патология, при которой наблюда-ется поражение преимущественно нервной системы, реже в процесс вовлекаются печень, селезенка и легкие. По последним данным, НПС относят к заболеваниям, при которых происходит нарушение метаболизма холе-стерина, что приводит к накоплению липидов [1].Диагностика НПС крайне затруднительна как с клинической, так и с лабораторной точки зрения. Как правило, заболевание манифестирует в школьном возрасте с легкой задержки двигательного развития, и на первый план выходит моторная неловкость, неуклюжесть и частые падения, которые нередко сочетаются с изолированной сплено-или гепатоспленомегалией. Характерные невро-логические симптомы в виде вертикального и горизонталь-ного пареза взора появляются вслед за развитием мозжеч-ковых расстройств, смешанной дизартрии, дисфагии и интеллектуальных нарушений. Другие варианты течения НПС встречаются довольно редко. Так, к примеру, при начале заболевания в неонатальном возрасте ведущими симптомами являются тяжелое прогрессирующее пора-жение печени, грубая задержка психомоторного развития и фульминатное течение; в подростковом и взрослом возрасте преобладают медленно прогрессирующие психи-атрические расстройства. Гистологический признак болезни -пенистые клетки -не считается высокоспе-цифичным. На сегодняшний день основными методами подтверждения диагноза служат молекулярно-генетиче-ские тесты и нагрузочный тест с филипином в культуре клеток кожных фибробластов, который позволяет опре-делить степень накопления неэстерифицированного холе-стерина в лизосомах. Несмотря на разработанные тест-системы, надежных и простых диагностических способов для подтверждения диагноза до сих пор не существует, и в ряде случаев для установления диагноза необходимо проведение полного секвенирования генов NPC1 и NPC2, что является достаточно трудоемкой, длительной и доро-гостоящей процедурой.

No abstract

No abstract