Con la finalidad de lograr un aumento en la rentabilidad de la producción de papel tisú, esta investigación tuvo como objetivo identificar factores que incidan en el grado de refino de la pulpa e índice de tensión del papel tisú al utilizar fibra corta, fibra larga y enzima de refinación Quimizine B. La metodología consideró experimentos en laboratorio, obtención de curvas de refinación, diseño factorial multinivel y diagramas de superficie de respuesta. Los resultados indicaron que el factor común más significativo en el grado de refino de la pulpa e índice de tensión es el consumo específico de energía para ambos tipos de fibra y, que se pueden conocer parámetros óptimos de operación al analizar el grado de refino e índice de tensión en forma independiente y simultánea. Se concluyó que el diseño factorial multinivel permitió identificar factores significativos que influyen en las propiedades del grado de refino y la resistencia del papel tisú cuando se busca un óptimo individual y simultáneo y, que la influencia de la enzima aumentó las propiedades del grado de refino y la resistencia a la tensión del papel al utilizar materia prima de fibra corta y larga de Eucalyptus globulus y Pinus radiata, respectivamente.