Increased drug resistance to anti-malarials highlights the need for the development of new therapeutics for the treatment of malaria. To this end, the lactate dehydrogenase (LDH) gene was cloned and sequenced from genomic DNA of Plasmodium vivax ( PvLDH) Belem strain. The 316 amino acid protein-coding region of the PvLDH gene was inserted into the prokaryotic expression vector pKK223-3 and a 34 kDa protein with LDH activity was expressed in E. coli. Structural differences between human LDHs and PfLDH make the latter an attractive target for inhibitors leading to novel anti-malarial drugs. The sequence similarity between PvLDH and PfLDH (90% residue identity and no insertions or deletions) indicate that the same approach could be applied to Plasmodium vivax, the most common human malaria parasite in the world.

In the present study, lung, trachea and serum samples from broiler flocks slaughtered at an abattoir in Elazig province located in the East of Turkey were examined for the presence of Ornithobacterium rhinotracheale using culture and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The identity was latter proved by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), western blot analysis, and polymerase chain reaction (PCR) assays. A total of 324 serum and 250 lung and trachea samples were collected from 10 commercially reared chicken flocks showing respiratory manifestations. The samples were obtained from different flocks. The causative agent (ORT) was isolated from trachea (1.5%) of five chickens and from both lung and trachea (0.4%) of only one chicken in the bacteriological examination of tissues. The presence of antibodies against ORT was detected in 33 (10.2%) of the 324 sera by ELISA. A 784 bp fragment of the 16S rRNA gene was amplified using specific primers in the PCR. All ORT isolates that were positive by culture were also detected to be positive by the PCR. SDS-PAGE protein profiles of whole cell extracts showed a high similarity for all the isolates with a major band of the molecular weight of 33 kDa (kiloDalton). Results of Western blot analysis indicate four antigenic fractions predominantly with molecular weights of 33, 42, 52 and 66 kDa.

No abstract

In this study, lactate dehydrogenase gene from Plasmodium vivax has been tried to subclone into an expression vector. Some of the Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase mutant genes have also been tried to clone and subclone into a vector, but we failed to clone or subclone either of the genes. DNA visualisation in electrophoretic gels typically requires UV radiation and the fluorecent dye ethidium bromide. A crystal violet-stained gel was run instead of an ethidium bromide gel and so avoided the use of UV radiation. This enabled us to clone or subclone both Plasmodium vivax lactate dehydrogenase gene and Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase mutant genes into any desired vector.

Farmasötik endüstrisinde doğal bileşikler ve türevler önemli bir rol oynar. Ancak bu ürünlerin doğal konaktan izole edilmesindeki veya yeniden kimyasal olarak sentezlenmesindeki zorluklar, genellikle bunların bulunabilirliğini sınırlar, maliyeti yükseltir ve biyofarmasötik üretim sürecini yavaşlatır. Farmasötik metabolik mühendisliği, ilaçların ve ayrıca ilaç öncüllerinin keşif, tasarım ve üretiminde önemli bir rol oynamaktadır. Mikroorganizmaların daha yüksek titreler ve daha az maliyetle büyütülme kolaylığı nedeniyle küçük moleküllü ilaçların heterolog olarak bir mikrobiyal konakta yüksek hızda, düşük maliyet ve yüksek verimle istikrarlı olarak üretilmesi, bitkiler gibi doğal konaklarda üretimine veya kimyasal sentezine göre giderek daha popüler bir alternatif haline gelmektedir. Metabolik mühendisliği, mikroorganizmalar, bitkiler ve hayvanlardaki belirli genetik farklılıkların fizyolojik sonuçlarını inceleyerek ve ayrıca genler ve hücre fonksiyonları arasındaki bağlantıları anlamak için matematiksel ve hesaplamalı yöntemler tasarlayarak yeni mikrobiyal hücre fabrikalarının geliştirilmesine ve mevcut endüstriyel organizmaların iyileştirilmesine olanak tanır. Mikroorganizmalardaki endojenik metabolik yolaklarla çeşitli heterolog biyosentetik yolakların entegre edilerek yeni sentetik yolakların tasarlanması, inşası ve optimizasyonu için sentetik biyoloji metodolojilerini kullanır. Metabolik olarak tasarlanmış organizmaların optimizasyonu, bu endojenik ve heterolog yolak proteinlerinin dengeli düzeylerde üretilmesinin iyi anlaşılmasını gerektirir. Böylece, metabolik mühendisliğinin uygulanması, tüm üretim sürecini hızlandırmayı amaçlayan heterolog mikroorganizmalarda büyük miktarlarda biyofarmasötiklerin verimli bir şekilde üretilmesini sağlayabilir. Bu derleme çalışmasında biyofarmasötiklerin metabolik mühendisliği yaklaşımıyla mikrobiyal hücre fabrikalarında üretiminin tasarlanması, üretimi ve optimizasyon koşulları incelenmiştir.