We report the analysis and characterization of natural and modified oligonucleotides by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). The present technology was highly improved for this class of compounds by using a new matrix, 2,4,6-trihydroxy acetophenone, together with di- and triammonium salts of organic or inorganic acids to suppress peak broadening due to multiple ion adducts. This methodology can be used in combination with time dependent degradation of oligonucleotides by exonucleases as powerful tool to determine sequence compositions.

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Structure 1 has been established for roridin E (Cz9Ha808), an antibiotic isolated from cultures of Myrothecium species. Base catalysed hydrolysis of 1 gave the known sesquiterpene alcohol verrucarol (4; C,,H,,O,) and 2'-anhydrororidinic acid (6 ; C,,H,O,), a new dicarboxylic acid. The structure of 6 was determined by spectral analysis of its dimethyl ester 7, dimethyl hexahydro-2'-anhydrororidinate (9), the acetyl derivative 10, and the oxidation product 11. Das Antibioticum Roridin E ist in relativ geringenMengen aus Kulturen von Myrothecium-Arten isoliert worden [2]. Am besten wird es aus Kulturfiltraten des Stammes S 1135 von Myrothecium verrucaria gewonnen. Die Hauptmetabolite dieses Stammes sind Verrucarin A [3], Roridin A [4], Roridin H [l] und Roridin D [5]. Die Abtrennung des Roridins E von diesen Produkten gelingt erst durch wiederholte Chromatographie an Kieselgelsaulen und Kieselgel-Dickschichtplatten, wobei die Trennung des Roridins E von Roridin D besonders schwierig ist. 1. Summelzformel. Roridin E kristallisiert in zwei Modifikationen vom Smp. 183-184" bzw. 220-222";[a]:3 = -16" f 1" (Chloroform). Nach den Elementaranalysen und dem hochaufgelosten Massenspektrum l) (Molekel-Ion bei m/e 514,2527 f 0,011) besitzt es die Formel C,,H,,O, . Das MassenspektIum von Octahydrororidin E (s. unten) bestatigte diese Formel. Auf Grund der im folgenden beschriebenen chemischen und physikalischen Eigenschaften erteilen wir Roridin E die Strukturformel 1. 2. Funktionelle Gruppen. Das UV.-Spektrum von Roridin E (I) in Athanol ist durch drei intensive Absorptionsmaxima bei 198,5 (4,26), 218 (4,25) und 262 (3,98) nm (log&) gekennzeichnet. Das 1R.-Spektrum (vgl. Fig. 1) in Methylenchlorid zeigt eine breite Carbonyl-Streckschwingung bei 1710 cm-l und zwei C=C-Banden bei 1656 und 1603 cm-l. Diese Absorptionen sind auf eine cr,j3,y, S-ungesattigte Estergruppierung zuruckzufuhren, wie sie auch in den bisher beschriebenen Verrucarinen und Roridinen vorkommt. Das zusatzliche UV.-Maximum bei 218 nm wurde bisher nur noch bei Verrucarin J [6] und Roridin H [l] beobachtet und weist auf eine weitere zusatzliche a,@-ungesattigte Estergruppierung hin. Im 1R.-Spektrum von Roridin E (1) ist ausserdem noch eine starke Hydroxyl-Streckschwingung bei ca. 3500 cm-l sichtbar. Mit Acetanhydrid und Pyridin bei 22" lieferte Roridin E (1) das Mono-Oacetylderivat 2, dessen 1R.-Spektrum keine HO-Bande mehr aufwies. Roridin E (1) enthalt somit eine acetylierbare Hydroxylgruppe. Das 100-MHz-NMR.-Spektrum von Roridin E (1) (vgl. Fig. 2 und Tabelle 1) lasst vier Methylgruppen erkennen, wovon zwei (C-14 und C-16) sich im Verrucarolteil 1) z, Wir danken Herrn Dr. H . Lichti, Sandoz AG, Basel, fur die Aufnahme dieses Massenspektrums (CEC.-Massenspektrometer 21-llOB). Die genaue Masse liess sich nicht bestimmen, da die Spitze des Molekel-Ions zu schwach war.

SummarySambucinol (2) and sambucoin (4), two CIS-trichothecenes, have been isolated from cultures of Fusarium sambucinum. The structures were deduced from spectroscopic data and by X-ray diffraction. A hypothetical biogenetic pathway is proposed.The trichothecenes are a growing class of closely related sesquiterpenoid secondary metabolites produced by moulds, especially various species of Fungi imperfecti [2]. Many members of the family display a wide range of biological effects, such as cytostatic (antileukemic) activity, but they are also highly toxic.In 1965 Flury et al. [3] have isolated diacetoxyscirpenol (anguidine) (1) from cultures of Fusarium diversisporum and Fusarium sambucinum. Working up a largescale fermentation we have found that thc latter microorganism (ATCC No. 11852) produces besides anguidine (l), which is the major metabolite, a series of hitherto unknown minor metabolites. In this communication we report the isolation and structural elucidation of two of these new compounds, which we name sambucinol (2) and sambucoin (4).The culture filtrate of a 70-liter fermentation2) was extracted with AcOEt. The extracts yielded after workup according to known procedures [3b] 46.7 g of crude product. After separation of ca. 20 g of 1 by crystallization, the mother liquor was further purified by repeated chromatography on silica gel (AcOEt/petroleum ether and CH,Cl,/acetone). By this method pure samples of sambucinol (I!) and of the less polar sambucoin (4) were obtained. Sambucinol(2) (yield ca. 3 mg/l) crystallized from acetone, m.p. 227"; [a];' = -22.6" (c = 1.3, pyridine); IR (KBr): 3350 (br.), 1675. A composition of C,,H,,O, was secured by elemental analysis (found: C 67.28%, H 8.31%, calc.: C 67.65%, H 8.33%) and by ') 40th Commun.: [I]. ' )We thank Dr. E. Hurri, Sundoz AG. Basel, for carrying out this fermentation