The cDNAs of three hypoxia-inducible factor (HIF) alpha-subunits were cloned from RNA of primary rat hepatocytes by reverse transcriptase PCR. All three cDNAs encoded functionally active proteins, of 825, 874 and 662 amino acids. After transfection they were able to activate luciferase activity of a luciferase gene construct containing three HIF-responsive elements. The mRNAs of the rat HIF alpha-subunits were expressed predominantly in the perivenous zone of rat liver tissue; the nuclear HIFalpha proteins, however, did not appear to be zonated.

The cDNAs of three hypoxia-inducible factor (HIF) α-subunits were cloned from RNA of primary rat hepatocytes by reverse transcriptase PCR. All three cDNAs encoded functionally active proteins, of 825, 874 and 662 amino acids. After transfection they were able to activate luciferase activity of a luciferase gene construct containing three HIF-responsive elements. The mRNAs of the rat HIF α-subunits were expressed predominantly in the perivenous zone of rat liver tissue; the nuclear HIFα proteins, however, did not appear to be zonated. The sequence data reported here have been deposited in the EMBL Nucleotide Sequence Database under the following accession numbers: rHIF1α, Y09507; rHIF2α, AJ277828; rHIF3α, AJ277827.

The integration of multiple signaling pathways is a key issue in several aspects of embryonic development. In this context, extracellular inhibitors of secreted growth factors play an important role, which is to antagonize specifically the activity of the corresponding signaling molecule. We provide evidence that the Hedgehog-interacting protein (Hip) from Xenopus, previously described as a Hedgehog-specific antagonist in the mouse, interferes with Wnt-8 and eFgf/Fgf-8 signaling pathways as well. To address the function of Hip during early embryonic development, we performed gain- and loss-of-function studies in the frog. Overexpression of Xhip or mHip1 resulted in a dramatic increase of retinal structures and larger olfactory placodes primarily at the expense of other brain tissues. Furthermore, loss of Xhip function resulted in a suppression of olfactory and lens placode formation. Therefore, the localized expression of Xhip may counteract certain overlapping signaling activities, which inhibit the induction of distinct sensory placodes.

Einfluß der Überexpression vonHip und Shh auf die Musterbildung im embryonalen Gehirn 4.5.4 Ektopische Photorezeptorzellen in der Retina nach Überexpression von Hip 4.6 Verstärkte Aktivität eines sezernierten Hip-Konstruktes (mHip∆TM) 4.7 Vergleich der Überexpression von Hip mit der Inhibition des Shh-, Fgfund Wnt8-Signalwegs 4.8 Nachweis des retinalen Primordiums durch Zellmarkierung 4.9 Einfluß der Überexpression von Hip und Shh auf die Musterbildungsprozesse in frühen Embryonen 4.10 Die Vergrößerung des Auges nach Überexpression von Hip wird nicht durch Proliferation oder verminderte Apoptose verursacht 4.10.1 Überexpression von Hip bewirkt keine Verminderung der Apoptoserate im Auge 4.10.2 Die Expansion des frühen Augenfeldes nach Überexpression von Hip wird nicht durch eine erhöhte Proliferationsrate bewirkt 4.10.3 Die von Hip ausgelöste Expansion des frühen Augenfeldes wird durch Inhibition von Mitose nicht verhindert4.11 mHip und Xhip haben die gleiche Aktivität in Xenopus laevis-Embryonen 5. DISKUSSION 5.1 Konservierte Domänen im putativen Xhip-Protein 5.2 Expression und Regulation von Xhip 5.3 Hip ist ein multifunktioneller Antagonist von Shh-, Fgf-und Wnt-Signalen 100 5.3.1 Hip kontrolliert den Shh-, Fgf-und Wnt-Signalweg in animalen Gewebeexplantaten und im ganzen Embryo 100 5.3.2 Hip, Shh, Fgf8 und Wnt8 werden in Xenopus laevis-Embryonen komplementär exprimiert 103 5.4 Die Überexpression von Hip beeinflußt die Musterbildung innerhalb der sich entwickelnden Augen 104 5.4.1 Die Auswirkungen der Überexpression von Hip verdeutlichen den Einfluß von Shh auf die proximo-distale Gliederung des Auges 104 VI Inhaltsverzeichnis 5.4.2 Die vergrößerten Augen nach Überexpression von Hip enthalten ektopische Photorezeptorzellen 5.5 Der Effekt der Überexpression von Hip auf die Augenentwicklung wird durch die Inhibition sowohl des Shh-als auch des Fgf-und Wnt-Signalwegs veranschaulicht 5.6 Hip beeinflußt die Anzahl der Vorläuferzellen in der anterioren Neuralplatte durch Änderung des Zellschicksals 5.7 Modell der Spezifikation des frühen Augenfeldes durch die Einwirkung von Shh-, Fgf-und Wnt-Signalen 5.8 Funktion von Hip in Xenopus laevis: Verteidiger des Zellschicksals gegen den Einfluß von Shh,