Broth και τρυβλίων με L-άγαρ 60 2.2 Παρασκευή βακτηρίων επιδεκτικών προς μετασχηματισμό 60 3.2 Μετασχηματισμός βακτηρίων με πλασμιδιακό DNA 64 4.2 Ανάπτυξη υγρών καλλιεργειών βακτηρίων 64 5.2 Παρασκευή βακτηριακών αποθεμάτων γλυκερόλης 65 6.2 Απομόνωση πλασμιδιακού DNA σε μικρούς όγκους ('Mini prep') 65 7.2 Απομόνωση πλασμιδιακού DNA σε μεγάλους όγκους ('Maxi prep') 66 Ενότητα Β: Κυτταρική καλλιέργεια 68 8.2 Κυτταρικές σειρές και καλλιέργεια κυττάρων 68 9.2 Ανακαλλιέργεια κυττάρων 10.2 Διατήρηση κυττάρων σε υγρό άζωτο (κατάψυξη κυττάρων) 11.2 Απόψυξη και ανασύσταση κυττάρων 12.2 Επεξεργασία κυττάρων Jurkat με γενιστενίνη (Gen) ή δαϊζείνη (Dz) 13.2 Χορήγηση 2-μεθοξυοιστραδιόλης (2-ΜΕ) σε κύτταρα Jurkat 14.2 Καταμέτρηση κυττάρων με αιμοκυτταρόμετρο (Neubauer Chamber) 15.2 Καμπύλες αύξησης των κυττάρων Jurkat 16.2 Ανάλυση των κυττάρων Jurkat με κυτταρομετρία ροής Ενότητα Γ: Απομόνωση και ανάλυση νουκλεϊκών οξέων 17.2 Απομόνωση χαμηλού μοριακού βάρους γενωμικού DNA 18.2 Ηλεκτροφόρηση DNA σε πηκτή αγαρόζης 19.2 Κοπή πλασμιδίων με περιοριστικά ένζυμα Ενότητα Δ: Απομόνωση και ανάλυση πρωτεϊνών 20.2. Απομόνωση κυτταρικών εκχυλισμάτων για την ανάλυση πρωτεϊνών 21.2 Ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών 22.2 Χρώση της πηκτής SDS-πολυακρυλαμιδίου 83 23.2. Ανάλυση πρωτεϊνών με ανοσο-αποτύπωμα κατά Western 83 Ενότητα Ε: Εισαγωγή γονιδίων σε κύτταρα θηλαστικών 84 24.2 Ρετροϊικοί φορείς (Retroviral vectors) 84 25.2. Παραγωγή ρετροϊών με διαμόλυνση DNA 87 8 26.2 Επιμόλυνση των κυττάρων Jurkat με τους ρετροϊούς 88 3 ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΤΡΙΤΟ: ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Ενότητα A: Οι επιδράσεις της 2-μεθοξυοιστραδιόλης στην 90 απόπτωση και στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Jurkat: Ο ρόλος της Bcl-2 1.3 Η 2-μεθοξυοιστραδιόλη επάγει απόπτωση στα κύτταρα Jurkat 2.3 Η Bcl-2 αναστέλλει την απόπτωση των κυττάρων Jurkat που επάγεται από τη 2-μεθοξυοιστραδιόλη 94 3.3 Η επίδραση της 2-μεθοξυοιστραδιόλης στην έκφραση των Bcl-2 και Bak 98 4.3 Η Bcl-2 επάγει τη διακοπή της αύξησης των Jurkat στη G1 φάση του κυτταρικού κύκλου μετά τη χορήγηση 2-μεθοξυοιστραδιόλης 100 5.3 Η διακοπή της αύξησης των Jurkat στη G1 φάση του κυτταρικού κύκλου συσχετίζεται με τη μεταβολή ίης έκφρασης των κυκλινοεξαρτώμενων αναστολέων των κινασών, ρ21 waf-i/óipi/sidi KQ/ p27KiP1 102 Ενότητα Β: Οι επιδράσεις των φυτο-οιστρογόνων ισοφλαβονοειδών, γενιστενίνης και δαϊζείνης, στον πολλαπλασιασμό και στην απόπτωση των κυττάρων Jurkat: Ο ρόλος της Bcl-2 6.3 Η γενιστενίνη είναι ισχυρότερος επαγωγέας της απόπτωσης των καρκινικών Τ-λεμφοκυττάρων Jurkat από τη δαϊζείνη 7.3 Η σι/π-αποπτωτική πρωτεΐνη Bcl-2 αναστέλλει την απόπτωση των κυττάρων Jurkat που επάγεται από τα ισοφλαβονοειδή, γενιστενίνη και δαϊζείνη 4 ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΤΕΤΑΡΤΟ: ΣΥΖΗΤΗΣΗ Μηχανισμός δράσης της 2-μεθοξυοιστραδιόλης σε καρκινικά κύτταρα σε σχέση με την κυτταρική αύξηση και επιβίωση Οι επιδράσεις των ισοφλαβονοειδών, γενιστενίνης και δαϊζείνης, σε καρκινικά κύτταρα Μελλοντικές ερευνητικές κατευθύνσεις ΠΕΡΙΛΗΨΗ (της διδακτορικής διατριβής στην Ελληνική γλώσσα) 119 ΠΕΡΙΛΗΨΗ (της διδακτορικής διατριβής στην Αγγλική γλώσσα) 5 ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 123 9 ΣΧΗΜΑΤΑ Σελίδα...