Резюме. Высокая заболеваемость краснухой в Российской Федерации и низкая регистрация синдрома врожденной краснухи по сравнению с расчетной требуют совершенствовать диагностику краснушной инфекции. В данной работе показана возможность раннего обнаружения вируса краснухи путем заражения чувствительных клеточных культур назофарингеальными смывами и детекции краснушного антигена с помощью высокоспецифичных моноклональных антител к основному структурному белку Е1 вируса краснухи прямым иммунофлюоресцентным методом. Постановка быстрого культурального метода позволяет в течение 5 часов с момента инфицирования чувствительных клеток Vero E6 или BHK-21-F установить этиологический диагноз с высокой специфичностью.

Clinical picture of diseases caused by VZV in immunocompromised patients is often differed from healthy people and has no visible skin damage. Diagnostics in such cases is difficult but it is important to find out real reason of health deterioration for assignment the treatment. That explains usefulness of molecular methods in diagnostics of VZV-infection. So the goal of this study was checking out usefulness of diagnostics based on detection viral DNA in clinical samples by real-time PCR method. We used pools of peripheral blood samples from sick and healthy patients as clinical materials for analysis and Varilrix vaccine sample as a source of positive control viral DNA. Main methods used here were DNA extraction and real-time PCR in the version of TaqMan probes; amplification reactions were made in triplicates for each sample with standard deviation of threshold cycles less than 1.5%. Amplification results of clinical samples from patients were analyzed by comparison with the results from positive control viral DNA. Final resulting figures were slightly varied and dependent on selected for amplification VZV genome fragment (orf 29 or orf 38), and viral DNA had been detected in 48% of sick patients and only in 4% of practically healthy donors without zoster symptoms. Concluding, we approved the possibility of use real-time PCR as a molecular method for laboratory diagnostics VZV-infection including atypical and subclinical disease forms. One of the advantage of the method described is the possibility of DNA detection straight from blood samples (without extra purification steps such as preparation mononuclear cell fraction from blood samples), therefore this approach can accelerate and simplify diagnostic procedure.

The rapid culture method for the indication of antigens of rabies virus has been improved. It allows to detect the antigen of rabies virus within 5 hours from the moment the cell cultures was infected. To achieve this aim it is necessary to use cell culture BHK-F, polyclonal antirabies FITC labelled immunoglobulin and direct method of membrane immunofluorescense. Applying of twofold freshly filtrated 3% paraformaldehyde as fixing solution allows to detect early virus proteins of rabies virus.

Резюме. Введение. Известно, что интерферон (IFN), представляющий собой цитокин, является важной частью иммунной системы и необходим для полного выражения иммунного ответа на антигенный стимул. Также считается, что каждый антиген является интерфероногеном. В связи с тем, что интерфероны индуцируют антивирусное состояние посредством связывания со специфическими рецепторами, то эти рецепторы можно определять непосредственно на клеточных мембранах иммунокомпетентных клеток человека. Цель. Оценить интерфероногенность некоторых серотипов вирусов гриппа А по показателям функциональной активности αи γ-интерфероновых рецепторов (IFNAR и IFNGR) на мононуклеарных клетках периферической крови человека (МКПК), индуцированных in vitro вирусами гриппа А различных серотипов. Материалы и методы. Метод основан на выделении лимфоцитов из венозной гепаринизированной крови человека, индуцировании лимфоцитов in vitro при 36,5°С в атмосфере 5% СО 2 , забора образцов в различные временные интервалы, окраске их ФИТЦ-конъюгатом на основе мышиных антиидиотипических антител, структурно имитирующих IFNα и IFNγ человека, то есть антирецепторных антител для IFNα и IFNγ человека, фиксировании окрашенных образцов параформальдегидом и оценке показателей экспрессии интерфероновых рецепторов (IFNR) на проточном цитометре. Результаты. В экспериментах in vitro выявляли интерфероногенность трех серотипов вируса гриппа А/ PR8/34 (H1N1), Краснодар/101/59 (H2N2) и Рязань/6103/87 (H3N2). Мононуклеарные клетки периферической крови (МПК) донора с группой крови «0», резус плюс, индуцировали облученной неинфекционной аллантоисной жидкостью с гемагглютинирующей активностью. Экспрессию IFNAR и IFNGR на МПК выявляли с помощью маркеров IFNR человека, меченых флуоресцеинизотиоцианатом и оценивали в проточном цитофлуориметре. Паралельно сравнивали экспрессию IFNAR и IFNGR на МПК, праймированных и непраймированных малыми дозами IFNα человека. Было установлено, что экспрессия IFNAR на МПК, индуцированных антигеном вируса гриппа А/PR8/34 (H1N1) c высокой гемагглютинирующей активностью была выше у праймированных МПК в сравнении с непраймированными и выше в сравнении с экспрессией IFNAR на МПК, индуцированных антигенами вирусов гриппа А/Краснодар/101/59 (H2N2) и А/Рязань/6103/87 (H3N2) c более низкой гемагглютинирующей активностью. Необходимо отметить, что экспрессия IFNAR на МПК, индуцированных антигеном вируса гриппа А/PR8/34 (Н1N1) и праймированных малыми дозами IFNα, держалась на высоком уровне, начиная с 1 часа с момента индукции антигеном и продолжалась на высоких цифрах в течение 5 часов. Анализ уровня экспрессии IFNGR на МПК, индуцированных антигенами вируса гриппа А различных серотипов показал, что, во-первых, усиление экспрессии IFNGR на МПК, праймированных низкими дозами IFNα не происходило.

Until now, it has been considered that infectivity of the varicella-zoster virus (VZV) is closely related to target cell, and newly formed virus is not released into the culture medium. It is also known that it is hard to grow VZV in cell cultures, due to its slow replication rate and a limited range of sensitive cell cultures. In addition, VZV isolation depends on type of cell culture used, nature of clinical material, presence of viable virus and transport time. Objectives. To study production of infectious extracellular VZV in various cell cultures. Materials and methods. Eight cell cultures were used, including human embryonic diploid lung cells and human embryonic dermomuscular tissue (KM-27), as well as continuous human and monkey cell lines. Crusts detached from vesicular lesions were used as clinical isolates, which were placed into cryo-vials added with transport medium and transferred in liquid nitrogen. VZV infectivity was assessed in cell cultures by using hemo-adsorption assay with erythrocyte suspension isolated from guinea pig or human zero group blood and confirmed by indirect immunofluorescence with polyclonal sera from varicella or herpes zoster convalescents. Results. There were examined 27 clinical samples consisting of crusts from vesicular lesions isolated from patients with chickenpox, as well as one sample from 63-year old patient with exacerbated recurrent herpes zoster. Primary infection with clinical isolates was performed on diploid human lung embryo cells (HLEC) at low temperature. It was found that clinical samples collected within day 1–18 inclusive after the onset of skin eruption were able to induce cytopathic effects in HLEC cell monolayer such as cytolysis around dermal crusts. Specificity of cytopathic effect was confirmed by using real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). Viral antigens were prepared on 7 cell lines infected with the laboratory strain Ellen VZV (USA) to assess the immune sera. A high anti-VZV specificity of mouse sera was detected by ELISA while all the lysates of infected cell lines were used as the solid-phase sorbent. In experiments on VZV reproduction demonstrated that extracellular virus was released into the culture medium starting from day 1 after infection of target cells, and infectivity of the virus-containing fluid ascends during further cultivation.