Цель исследования. Разработка техники трансплантации 3D-клеточных сфероидов ретинального пигментного эпителия (РПЭ) на глазах экспериментальных животных (кролики). Материалы и методы. 3D-сфероиды РПЭ для последующей трансплантации создавали с использованием агарозных планшетов (3D Petri Dishes, Microtissue, США). Фенотип полученных клеточных культур исследовали с помощью иммуноцитохимического анализа (лазерный сканирующий конфокальный микроскоп «Fluo View FV10i», Olympus, Япония). Всем экспериментальным животным (кролики породы шиншилла, n = 10) выполняли витрэктомию-2500 резов в минуту, вакуум 600 мм рт. ст. (Alcon, Accurus, США), ретинотомию и субретинально вводили сфероиды РПЭ (MicroDose injection kit 1 ml, Med One, США). Методы послеоперационного контроля: ультразвуковое В-сканирование глаза (Ultrasonic UD-6000, Tomey, Япония) и оптическая когерентная томография-ОКТ (Askin Spectralis, Heidelberg engineering, Германия). Глазные яблоки энуклеировали на 7, 10, 14, 20-е сутки для последующего гистологического исследования. Результаты. Иммуноцитохимическое окрашивание выявило сохранение фенотипа РПЭ в форме 3D-сфероидов. В послеоперационном периоде у всех экспериментальных животных по данным ультразвукового В-сканирования и ОКТ отмечалась схожая клиническая картина: отек и плоская отслойка сетчатки в зоне оперативного вмешательства. По мере наблюдения сетчатка прилегала и отек сетчатки уменьшался. Также, по данным ОКТ, субретинально обнаруживались округлые конгломераты диаметром от 60 до 80 мкм-предположительно 3D-сфероиды РПЭ. По данным гистологического исследования отмечалась адгезия сфероидов РПЭ к сосудистой оболочке с последующим распластыванием и образованием нового клеточного слоя по мере увеличения сроков наблюдения. Заключение. Предложенная технология культивирования кроличьего РПЭ с последующим конструированием 3D-сфероидов позволяет сохранить эпителиальный фенотип клеток. Разработанная хирургическая техника трансплантации РПЭ является приемлемой и может использоваться для дальнейших экспериментальных исследований с целью внедрения в клиническую практику. Ключевые слова: ретинальный пигментный эпителий, 3Dсфероиды, возрастная макулярная дегенерация.

No abstract

The interplay of multipotent stromal cells derived from the orbital fat pads and cells of the lipoaspirate from the subcutaneous adipose tissue was studied using in vitro co-transplantation model in an organ culture in a collagen gel. Microscopy findings and intensity of apoptosis and cell proliferation in cultures of lipoaspirate with and without multipotent stromal cells showed that the cells maintained their viability, proliferation capacity, and cytokine secretion activity. Higher proliferatitive activity of cells in cocultures promotes renewal of fat transplant cells and can help to maintain its stable volume in delayed terms after transplantation.

According to the World Health Organization, corneal blindness is the fourth most common cause of blindness and visual impairment worldwide. In Russia, up to 18% of blindness is caused by corneal damage. Limbal stem cell deficiency (LSCD) is one of the causes of corneal blindness and visual impairment due to anterior epithelial replacement with fibrovascular pannus. Bilateral LSCD may develop in patients with aniridia, Steven-Jones syndrome, and severe corneal burns of both eyes, leading to severe decrease in visual acuity in both eyes and, as a consequence, physical disability associated with blindness. In such cases, cell therapy, based on autologous oral epithelial culture as an alternative to allogeneic limbus transplants, is proposed for reconstruction of the anterior corneal epithelium. This new treatment method promotes corneal reepithelization, better visual acuity, reduced nonspecific ocular complaints and improved quality of life of patients. The effectiveness and significant increase in the frequency of transparent engraftment of donor corneas after cell therapy drives huge interest in this topic all over the world. This review presents literature data on the features of histotopography and methods for obtaining a cultured autologous oral mucosal epithelium, on cell markers that are used to identify epithelial cells, and on methods for creating cell grafts for subsequent transplantation to the corneal surface in LSCD patients.