Introdução: A promoção da saúde sexual e reprodutiva (SSR) dos estudantes do Ensino Superior continua a ser uma prioridade das políticas de saúde pública, dado que vários estudos têm documentado prevalências elevadas de comportamentos de risco sexual neste grupo. O conhecimento é um conceito central das teorias comportamentais, considerado como um pré-requisito fundamental para uma educação sexual de sucesso. Objetivos: Caracterizar o conhecimento sobre SSR dos estudantes do Ensino Superior e analisar a sua associação com comportamentos promotores da SSR. Metodologia: Foi realizado um estudo transversal analítico, numa amostra de 1946 estudantes, de uma Universidade do norte de Portugal, com idade média de 21 anos (20,74 ±2,32). Na recolha de dados foi utilizado um questionário de caracterização sociodemográfica e dos comportamentos de SSR e o Inventário de Conhecimento Sobre SSR, organizado em quatro áreas temáticas (fisiologia da reprodução, contraceção, infeções sexualmente transmissíveis (IST), vigilância da saúde). Os dados foram analisados com recurso à estatística descritiva e inferencial (ANOVA). Resultados: O nível de conhecimento sobre SSR é mediano (22,27 ± 5,79), a área de maior conhecimento é a contraceção e a de menor conhecimento as IST e vigilância de saúde. O nivel de conhecimento é mais elevado no sexo feminino (p<0,05), estudantes mais jovens (p=0,005) e que frequentam cursos das áreas das ciências da vida e saúde (p < 0,001). O conhecimento está associado positivamente com uma maior adesão a comportamentos de contraceção (p=0,03), utilização dos serviços de SSR (p<0,01) e menor adesão a comportamentos de risco sexual, nomeadamente o consumo de álcool (p<0,001), drogas (p<0,001) e parceiros ocasionais (p<0,001). Conclusões: Aumentar o conhecimento e dos estudantes do Ensino Superior sobre SSR parece ser importante, para melhorar comportamentos de proteção e diminuir o risco sexual e reprodutivo. As universidades podem ser com contexto privilegiado para intervenção em educação sexual e reprodutiva.