A method for determining zygosity of transgenic zebrafish by TaqMan real-time PCR

Functions of flt3 in zebrafish hematopoiesis and its relevance to human acute myeloid leukemia

“…Reverse transcription PCR has been described previously. 36,37 Whole-mount phospho-Histone H3 (Ser10) immunostaining…”

Growth hormone transgene effects on growth performance are inconsistent among offspring derived from different homozygous transgenic common carp (Cyprinus carpio L.)

“…Quantitative PCR using TaqMan probe or SYBR Green fluorescent dye has been used successfully to distinguish homozygous transgenic rats (Tesson et al, 2002), zebrafish (Ji et al, 2005) and mice (Haurogne et al, 2007;Sakurai et al, 2008) from hemizygous counterparts. In the present study, we determined the zygosity of transgenic fish using SYBR Green fluorescent qPCR followed by data analysis based on the 2 − ΔΔCt method.…”

IDENTIFIKASI ZIGOSITAS IKAN LELE (Clarias gariepinus) TRANSGENIK F-2 YANG MEMBAWA GEN HORMON (PhGH) DENGAN MENGGUNAKAN METODE REALTIME-qPCR

“…Klasifikasi zigositas hanya dapat dilakukan dengan menggunakan pengukuran jumlah kopi transgen secara kuantitatif, pada ikan transgenik homozigot terdapat perbedaan jumlah kopi transgen sebesar dua kali jika dibandingkan dengan ikan transgenik heterozigot (Zhong et al, 2012). Beberapa metode yang telah berhasil dilakukan untuk mengindentifikasi zigositas ikan transgenik adalah dengan menggunakan metode Southern blot dan analisis semi-kuantitatif PCR Martinez et al (1999), real-time PCR menggunakan TaqMan Probe (Bubner et al, 2004;Mitreèiae et al, 2005;Ji et al, 2005) dan baru-baru ini pengembangan sistem identifikasi zigositas dengan menggunakan SYBR Green real-time PCR telah dilakukan pada mencit transgenik, metode ini sangat mudah dan murah (Haurogné et al, 2007;Sakurai et al, 2008).…”

“…Jumlah kopi transgen pada ikan lele dapat dideteksi secara tepat, namun nampaknya pada penelitian ini identifikasi zigositas ikan lele transgenik F-2 masih mempunyai zigositas yang bersifat heterozigot. Hasil penelitian yang sama dilaporkan oleh (Ji et al, 2005) bahwa metode RTqPCR sangat akurat dan mudah diaplikasikan untuk ikan zebra transgenik. …”