Um planejamento de misturas foi usado para otimizar a composição da fase móvel para a separação dos carboidratos em mel por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Nove fases móveis ternárias de acetonitrila, água e acetato de etila, correspondendo a um planejamento centróide simplex com pontos axiais foram testadas para separar os carboidratos mais freqüentemente encontrados em amostras de mel. Os resultados sugerem que um modelo cúbico especial descreve precisamente as mudanças nas proporções destes solventes na fase móvel próxima a região ótima da separação dos picos. A adição de um terceiro solvente, acetato de etila, à fase móvel binária de água e acetonitrila permitiu uma melhora significativa na separação dos carboidratos que pode ser aplicada à análise quantitativa destes compostos em mel.A mixture design was used to optimize the mobile phase composition for separation of carbohydrates in honey by High Performance Liquid Chromatography. Nine ternary acetronitrile, water and ethyl acetate mobile phases corresponding to a simplex centroid design with axial points were test to separate those carbohydrates most frequently encountered in honey samples. The results suggest that a special cubic model accurately describes changes in the proportions of these solvents in the mobile phase close to the region of optimal peak separation. The addition of a third solvent, ethyl acetate, to binary mobile phase of water and acetonitrile permitted a significant improvement in carbohydrate separation that can be applied to the quantitative analysis of these compounds in honey.