Activity of Superoxide Dismutase Mimic of [Mn(salen)OAc] Complex Compound Non-enzymatically in Vitro Through Riboflavin Photoreduction

Abstract

The complex compound of [Mn(salen)OAc] can serve as mSOD and its activity has been determined nonenzymatically in vitro through riboflavin photoreduction. The complex was synthesized from Mn(OAc)2.4H2O and H2salen. Based on the elemental analysis, the C=56.69%; H=4.21%; and N=7.52% content are corresponding to the chemical formula of MnC18H17N2O4. The functional groups and ionic species in the complex have been analyzed by infrared spectroscopy and ESI-MS. SOD activity was determined by mixing complex at various concentrations with riboflavin and nitroblue tetrazolium (NBT), then the mixture was lighted with 20 watts tungsten lamp for 15 minutes in a closed box. Then the reduced NBT absorptions were measured at λ 560 nm. The difference of absorbance between standard and sample solutions (without and with riboflavin, respectively) was multiplied by 100% to obtain %inhibition of each various sample concentration against NBT. SOD activity was obtained from IC50 data defined as a 50% inhibition of the plot curve of % inhibition to the concentration of the complex. The result obtained for this compound is IC50 = 2.7 ± 0.1 µM as well as enzymatic method. Therefore, this method can be used to determine the SOD activity by giving more stability and accuracy of IC50 value.Keywords: [Mn(salen)OAc], SOD, non-enzymatic, photoreduction, riboflavin ABSTRAK Senyawa kompleks [Mn(salen)OAc] dapat berfungsi sebagai mSOD dan aktivitasnya telah ditentukan secara in vitro non-enzimatik melalui fotoreduksi riboflavin. Kompleks ini disintesis dari Mn(OAc)2.4H2O dan H2salen. Berdasarkan analisis unsur diperoleh kadar unsur C=56,69%; H=4,21%; dan N=7,52% yang sesuai dengan rumus kimia MnC18H17N2O4. Gugus fungsi dan spesi ion dalam kompleks tersebut telah dianalisis dengan spektroskopi inframerah dan ESI-MS. Aktivitas SOD ditentukan dengan mencampurkan kompleks pada berbagai konsentrasi dengan riboflavin dan nitroblutetrazolium (NBT), yang kemudian campuran tersebut disinari oleh lampu wolfram 20 watt selama 15 menit pada kotak tertutup. Setelah itu serapan NBT tereduksi diukur pada λ 560 nm. Perbedaan absorbansi antara larutan standar dan sampel (masing-masing tanpa dan dengan adanya riboflavin) dikalikan dengan 100% untuk mendapatkan % inhibisi dari setiap variasi konsentrasi sampel terhadap NBT. Aktivitas SOD diperoleh dari data IC50 yang ditentukan sebagai 50% inhibisi pada kurva aluran persen inhibisi terhadap konsentrasi kompleks. Hasil yang diperoleh untuk kompleks ini adalah IC50 = 2,7 ± 0,1 µM sama seperti pada metode enzimatik. Oleh karena itu metode ini dapat digunakan untuk menentukan aktivitas SOD dengan memberikan nilai IC50 yang lebih stabil dan akurat.

Metode Non-Enzimatik Riboflavin-Nitrobluetetrazolium (Rb-NBT) Sebagai Teknik Penentuan Aktivitas Penangkal Radikal Bebas Anion Superoksida pada Kompleks Mangan(III)-Salen

“…H 2 Salen (N,N'-bis(salisilidena)etana-1,2-diamina) sebagai prekusor ligan dalam senyawa kompleks disintesis melalui prosedur dan kondisi sintesis yang sama dengan yang telah dilaporkan sebelumnya (Deawati et al 2017 Masing-masing larutan kemudian dipipet menggunakan pipet mikro dan ditempatkan pada mikroplat. Dalam satu mikroplat, diatur penempatan masing-masing larutan uji, yaitu 3 baris larutan sampel, 3 baris larutan blanko 2, 1 baris larutan blanko 1, dan 1 baris larutan blanko 3.…”

“…Penentuan nilai IC 50 , yang merupakan aktivitas penangkal radikal superoksida dari sampel kompleks, didapatkan dengan menarik garis dari inhibisi 50% pada plot kurva antara persen inhibisi dan konsentrasi kompleks (Deawati et al 2017;Yan et al 2016).…”

“…Kompleks [Mn(salen)N(CN) 2 ] n memberikan nilai IC 50 = 3,4 0,4 M yang didapatkan dengan menarik garis dari inhibisi 50% pada plot kurva antara persen inhibisi dan konsentrasi kompleks pada Gambar 3. Ditentukan juga IC 50 dari kompleks [Mn(salen)OAc] untuk mengontrol mutu dari metode uji Rb-NBT, dengan nilai yang sebanding dengan hasil yang dilaporkan sebelumnya, yaitu 2,3 0,5 M (Deawati et al 2017).…”

“…Hasil uji McCF menunjukkan bahwa kompleks [Mn(salen)N(CN) 2 ] n memiliki nilai IC 50 di atas 100 µM, sedangkan aktivitas kompleks pembandingnya, yaitu [Mn(salen)OAc], memiliki IC 50 sebesar 100 µM yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan nilai yang telah dilaporkan sebelumnya sebesar 2,5 µM (Deawati et al 2017). Dengan demikian, hasil uji McCF yang dilakukan pada penelitian ini tidak dapat dipakai untuk menentukan aktivitas penangkal radikal bebas dari senyawa kompleks [Mn(salen)N(CN) 2 ] n .…”

“…Di dalam penentuan potensi penangkal radikal superoksida dari senyawa-senyawa kompleks mangan(III)-salen dan turunannya, pada umumnya digunakan uji in vitro secara tidak langsung yang disebut dengan uji superoksida dismutase (SOD) dengan menggunakan metode enzimatik McCord-Fridovich (McCF) dan metode non-enzimatik riboflavin-nitrobluetetrazolium (Rb-NBT) (Deawati, 2017). Melalui kedua uji tersebut dapat diketahui aktivitas penangkal radikal superoksida dengan menghitung nilai IC 50 , yaitu konsentrasi suatu senyawa yang dapat menghambat sebesar 50% dari reaksi reduksi suatu indikator oleh radikal superoksida.…”