Aggregatibacter actinomycetemcomitans y Fusobacterium nucleatum en biopelículas subgingivales de pacientes brasileños con y sin enfermedad periodontal: comparación de dos métodos de detección

Abstract

Objetivo: Realizar la detección comparativa de cepas de A. actinomycetemcomitans y F. nucleatum de muestras subgingivales por los métodos de cultivo y de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Métodos: Fueron evaluados 50 pacientes con periodontitis crónica (P) y 50 pacientes sanos (S). Las muestras fueron colectadas de bolsas periodontales y surcos gingivales. El cultivo bacteriano fue realizado en agar tripticasa de soya-suero de caballo-bacitracina-vancomicina, e incubado en anaerobiosis. La identificación bacteriana fue por métodos bioquímicos de fermentación de carbohidratos y por PCR. Resultados: Por el método de cultivo, de las 50 muestras de periodontitis, 9 (18%) fueron positivas para A. actinomycetemcomitans aislándose 17 cepas. También, de esas muestras, 10 (20%) fueron positivas para F. nucleatum aislándose 19 cepas. De las 50 muestras de pacientes sanos, solamente 1 (2%) fue positiva para A. actinomycetemcomitans obteniéndose 2 cepas, y 12 (24%) positivas para F. nucleatum con 18 cepas. Por PCR fueron observadas diferencias en la detección de A. actinomycetemcomitans, entre los tres pares de partidores utilizados, para muestras de bolsa periodontal y surco gingival: partidor AA, 96% y 86%; partidor FU, 48% y 42%; y partidor ASH, 24% y 6%. Los porcentajes de detección para F. nucleatum de muestras de P y S fueron: partidor FN-5047, 36% y 18%; y partidor 505-S, 8% para ambas muestras colectadas. Cepas de A. actinomycetemcomitans biotipo II fueron las más prevalentes. Conclusiones: EL método de PCR fue más sensible y específico en la detección bacteriana que el cultivo.

Fusobacterium nucleatum un comensal puente con otros microorganismos patógenos de la periodontitis

“…Otro medio de posible uso para el aislamiento de F. nucleatum, es el medio TSBV (agar tripticasa soya, suero de caballo, bacitracina, vancomicina), previa a la siembra, la muestra de biofilm subgingival es diluida en un medio VMG-I (Viability-Maintaining Microbiostatic Medium I), tomando un inoculo de 0,1 mL de la dilución para hacer la siembra en este medio. La incubación se hace en condiciones anaerobias (90% N2, 10% CO2) a 37% por 4 días (26) .…”

“…nucleatum reacciona de forma negativa a la coloración Gram, son catalasa negativa, H2S negativo, lipasa negativa e indol positivo. Se pueden hacer pruebas bioquímicas de fermentación de carbohidratos (glucosa, galactosa, lactosa, sacarosa y fructosa) para su identificación en su condición de cepa (26) . Pruebas moleculares pueden realizarse para la identificación de F. nucleatum, como la PCR (reacción en cadena de polimerasa), la cual tiene una gran especificidad y sensibilidad para detectar este microorganismo de muestras de biofilm subgingival (27,28) .…”