Aislamiento y caracterización de cepas colombiana de plasmodium falciparum

Abstract

Las cepas de P. falciparum necesarias para los estudios de vacunas antimaláricas requieren de una completa caracterización que incluye la historia clínica del paciente, el sitio de origen y de aislamiento de la infección. la adaptación al sistema de cultivo continuo, la sensibilidad a los antimaláricos, la presencia de nodulaciones íK+) en los eritrocitos infectados v la d i s~o n i b i l i d a d de las poblaciones originales de parásitos, ademés de su infectividad en primates del genero Aotus.Basados en estos criterios se aislaron y caracterizaron 8 cepas colombianas de P. falciparum obtenidas en cuatro de las principales áreas maláricas del país. Una de ellas, la capa FCB-l. ha sido adaptada en Aotus. en el cual desarrolla infecciones de alta virulencia. Las cepas cloroquina-resistentes parecen crecer en mejor forma que las sensibles, durante la fase de adaptación al cultivo continuo, representando una de las hipótesis para la rápida dispersión de las poblaciones de parásitos resistentes a la cloroquina.El cultivo continuo del P. falciparum ha permitido el avance de los estudios en inmunologia y quimioterapia de la malaria, ya que es posible tener una fuente constante de parásitos p a r a este tipo de investigaciones.Con la disponibilidad de cepas d e P. falciparum de diferentes áreas geográfi-cas mantenidas por este sistema. la identificación de las proteínas del parásito que están involucradas en la inducción de una adecuada respuesta inmune, es un paso indispensable p a r a la producción de una vacuna antimalárica de amplia cobertura. En la quimioterapia los estudios genéticos sobre la resistencia del P. folciporum a las drogas, a s í como el desarrollo de nuevas ténicas de sensibilidad in-vitro, únicamente pueden ser realizados con cepas adaptadas al cultivo continuo y con diferentes grados de susceptibilidad a los antimaláricos.Una cepa de P. falciparum h a sido definida tradicionalmente como una línea de parásitos establecida en cultivo continuo o en primates del género Aotus, en la cual se han determinado algunas de sus caracterís-ticas de crecimiento in-vitro. grado de infectividad en Aotus y sensibilidad a algunas drogas. Durante el cultivo continuo los parásitos pueden tener alteraciones en su estructura y cambios en su sensibilidad a los antimaláricos. Ha sido comunicada la * Médico, Jefe de l a Unidad de Inrnunologia de Malaria, Grupo de Microbiologia r I n m u n o l o g i a , I n s t i t u t o Nacional de Salud, Apartado a i r e o R o o~o , Bogotá.

Susceptibilidad in vitro de aislamientos colombianos de Plasmodium falciparum a diferentes antipalúdicos

“…En 2003, González y colaboradores evaluaron 18 aislamientos de las regiones del Pacífico y amazónica de Colombia y hallaron una frecuencia de resistencia a la cloroquina, la amodiaquina, la mefloquina y la quinina de 78%, 35%, 17% y 6%, respectivamente, con el uso de los mismos puntos de corte para la cloroquina y la quinina que se emplearon en este estudio (CI 50 >100 nM para cloroquina y CI 50 >500 nM para quinina), pero para la amodiaquina y la mefloquina los puntos de corte que utilizaron fueron significativamente menores (CI 50 >20 nM para la amodiaquina, en vez de 80 nM y CI 50 >24 nM para la mefloquina, en vez de 64 nM) (13 La baja sensibilidad encontrada en este estudio a la cloroquina (76% de los aislamientos presentaron CI 50 >100 nM) concuerda con los demás estudios de susceptibilidad in vitro en Colombia (8)(9)(10)(11)(12)(13), así como con la gran frecuencia de falla terapéutica que ha presentado la monoterapia con la cloroquina en nuestro país y confirma, una vez más, que no debe emplearse en ningún caso la monoterapia con este medicamento para el paludismo por P. falciparum (7).…”

“…Para comparar con el comportamiento de las muestras clínicas, se utilizaron las cepas FCB2 y NF54 como controles. La cepa FCB2 fue aislada y caracterizada en el Instituto Nacional de Salud de Colombia; se obtuvo de un paciente proveniente del municipio de San Martín (Meta) y es resistente a la cloroquina y sensible a la quinina (8). Por su parte, la cepa NF54 fue aislada de un paciente que se encontraba en el aeropuerto de Amsterdam (Holanda) y había estado en África, y es sensible a la cloroquina (20).…”

“…Del lapso entre 1982 y 2003 conocemos seis estudios de susceptibilidad in vitro en Colombia (8)(9)(10)(11)(12)(13); los seis evaluaron la cloroquina e informaron resistencia entre 0% y 97% (promedio: 59%; intervalo de confianza del 95% (IC): 49%-70%); cuatro evaluaron la amodiaquina y la resistencia reportada varió entre 0% y 35% (promedio: 15%; IC: 10%-21%) (10-13); dos evaluaron la mefloquina (resistencia 8% y 16%; promedio: 12%; IC: 9%-15%) (10,13); cuatro evaluaron la quinina y sólo en uno se encontró resistencia de 6%, pues en los demás fue cero (8)(9)(10)13); finalmente, dos evaluaron la sulfadoxinapirimetamina (resistencia 0% y 9%; promedio: 5%; IC: 1%-8%) (11,12). Para evaluar la susceptibilidad in vitro de P. falciparum a los antipalúdicos, se han desarrollado diferentes métodos que incluyen técnicas microscópicas (método de Rieckmann o Mark III), con radioisótopos (método radioisotópico), inmuno-enzimáticas (método HRP-2 y método DELI) y moleculares, entre otras (14).…”

Sexual forms obtained in a continuous in vitro cultured Colombian strain of Plasmodium falciparum (FCB2)

“…A group of Colombian P. falciparum isolates were adapted to continuous in vitro culture more than 30 years ago; the falciparum Colombia Bogotá 2 (FCB2) strain (an in vitro culture-adapted isolate from Colombia's Eastern Plains) from that group was described as having sexual differentiation capability [24]. This strain has been used for antigen analysis when developing an anti-malarial vaccine and in studies of the human immune response against the parasite [25][26][27].…”

“…This strain has been used for antigen analysis when developing an anti-malarial vaccine and in studies of the human immune response against the parasite [25][26][27]. This strain has been maintained in in vitro continuous culture since then but it was not known if it conserved its sexual differentiation ability or whether sexual forms could evolve to mature forms and infect local Anopheles species [24].…”