Aislamiento y caracterización parcial de una miotoxina del veneno de la serpiente Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae)

Abstract

ResumenSe ha purificado una miotoxina del veneno de la serpiente Bothrops atrox, empleando una columna de intercambio catiónico de CM-Sephadex C-50 equilibrada con buffer acetato de amonio 0,05M a pH 7. La miotoxina es una proteína básica, y por cromatografía de filtración y PAGE-SDS se ha determinado que tiene un peso molecular de 27 kDa, estando formada por dos cadenas polipeptídicas de 14 kDa cada una.La inoculación de la miotoxina en el músculo gastrocnemius de ratones albinos produce la liberación de creatina kinasa así como la necrosis del tejido. La miotoxina tiene actividad de fosfolipasa, anticoagulante y edemática, pero no hemolítica. Palabras claves: miotoxina, Bothrops atrox, veneno de serpiente, mionecrosis AbstractA myotoxin from Bothrops atrox snake venom was purified by cationic exchange on CM-Sephadex C-50 with 0,05M ammonium acetate pH 7. The myotoxin is a basic protein and by gel filtration and PAGE-SDS was demonstrated that protein has a molecular weight of 27 kDa and two polipeptides chain of 14 kDa each one.The inoculation of myotoxin in gastrocnemius muscle of white mice produce liberation of creatin kinase as well as myonecrosis. The myotoxin has phospholipasic, anticoagulant and edematic activity, but not hemolytic activity.

Inmunogenicidad del veneno de Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) y su evaluación por métodos inmunoenzimáticos

“…4a). En el caso del veneno de B. atrox se pueden observar bandas específicas entre los 25 y 60 kDa, las cuales corresponderían a proteínas tales como la miotoxina (27 kDa; Huatuco et al 2004) y la L-aminoácido oxidasa (60 kDa; Lazo et al 2007). Así mismo podría notarse la presencia de la atroxina, una metaloproteinasa dependiente de Ca2+, principal responsable del efecto proteolítico y hemorrágico de este veneno (19,9 kDa, Pantigoso et al 1996).…”

Análisis electroforético de proteínas del veneno de Bothrops atrox “jergón” (Ofidia: Viperidae) de distintas zonas geográficas de la Amazonia Peruana

“…Se preparó un gel discontinuo de Poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (PAGE-SDS) de acuerdo al método de [2] con un gel de apilamiento de 7.5% y 12% de corrido, luego se procedió a diluir el veneno 1:20 tratándolo en condiciones reductoras, seguidamente fue colocado en los pocillos del gel y se realizó el corrido electroforético durante 2 horas a 85V. Luego de la corrida electroforética el gel fue revelado utilizando azul de Coomassie utilizando el protocolo propuesto por de [10] Cuantificación de proteínas Se llevó a cabo por el método de [3], que consistió en el desarrollo de la curva estándar con 20 mg/ml de BSA, los cuales se mezclaron en 5 tubos, 1 ml de reactivo con 100 µl de los estándares y al cabo de 15 minutos se realizó la lectura a 540 nm, en el espectrofotómetro. Con los datos de concentración y absorbancia obtenidos se hizo la curva estándar y la ecuación de la recta correspondiente, utilizando el programa Microsoft Excel.…”

PURIFICACIÓN Y ALGUNAS PROPIEDADES BIOQUÍMICAS Y MOLECULARES DE UNA NUEVA FOSFOLIPASA A2 NO MIOTÓXICA DEL VENENO DE LA SERPIENTE Bothrops atrox

“…Por ello, se realizó un estudio proteómico de tres serpientes peruanas del género Bothrops donde concluyen que la PLA 2 es la segunda en abundancia en el veneno 7 . Además, se han estudiado a las PLA 2 en las serpientes, L. muta 6 y B. atrox 5 . Además, se caracterizó por primera vez a la miotoxina del veneno en B. brazili 17 .…”

“…Dentro de cada subgrupo, hay a su vez isoformas pudiendo ser; Asp49(D49) ácidas 1,16,19,20 , Asp(D49) básicas 10,12 y Lys49 (K49) básicas 10,12 , las cuales tienen diversos efectos biológicos. La isoforma básica ha sido la más investigada, siendo altamente miotoxica 5,10,12 , en tanto que a la isoforma ácida también se le atribuye diversos efectos biológicos; miotóxica 1,2,16,18 , hemolítica indirecta 16 , inhibidora de agregación plaquetaria 1,16,18 e hipotensiva 14,20 . No obstante, de todos ellos, el efecto miotóxico es el más grave ya que puede dañar irreversiblemente el tejido muscular y dar lugar a amputaciones.…”