Allogeneic and Xenogeneic Hepatocytes and Isolated From Proteins in the Correction of Metabolic Disorders in Acute Toxic Hepatopathy

Abstract

Аннотация. Проблема диагностики и терапии острых заболеваний печени продолжает оставаться актуальной и в настоящее время из-за сложности дифференциальной диагностики и оптимального выбора эффективных способов лечения на фоне про-должающегося роста количества пациентов данной нозологией. Целью исследования явилось установление эффективности культуральной жидкости фибробластов, ксено-и аллогенных гепатоцитов и выделенных из них белков в коррекции метабо-лических нарушений при острой токсической гепатопатии. Использование культуральной жидкости аллогенных гепатоцитов, ксеногенных гепатоцитов и фибробластов и особенно выделенных из них их белков в условиях острого токсического пора-жения печени (ОТПП) позволило эффективно корригировать нарушения метаболического статуса на системном уровне. Ключевые слова: культуральная жидкость, аллогенные гепатоциты, фибробласты, ксеногенные гепатоциты.Проблема диагностики и терапии острых заболева-ний печени продолжает оставаться актуальной и в настоящее время из-за сложности дифференциальной диагностики и оптимального выбора эффективных способов лечения на фоне продолжающегося роста ко-личества пациентов данной нозологией [1][2][3]. Неудо-влетворительные результаты лечения острого токсиче-ского поражения печени (ОТПП) во многом связывают с отсутствием эффективной патогенетической тера-пией [4][5][6], поэтому перспективным направлением в лечении таких состояний является использование кле-точных технологий, а именно культуральной жидкости ксенно-, аллогенных гепатоцитов и фибробластов [7, 8].Целью исследования явилось установление эффек-тивности культуральной жидкости фибробластов, ксено-и аллогенных гепатоцитов и выделенных из них белков в коррекции метаболических нарушений при острой токсической гепатопатии.Материал и методы исследования. ОТПП у 89 крыс-самцов Вистар проводили путем внутримышеч-ного его введения в дозе 3 мл/кг в виде 50% раствора в оливковом масле пятикратно с интервалом 24 ч [2]. С целью получения культуральной жидкости ксеноген-ных и аллогенных гепатоцитов (КЖКГ, КЖАГ) в среде 199 культивировали 5х10 7 клеток на 3 мл среды в тече-ние 6 ч. После истечения срока инкубации клетки оса-ждали центрифугированием (15 мин при 400 g). Кон-центрацию белка в культуральной жидкости опреде-ляли по методу Къельдаля. Полученную КЖАГ и КЖКГ вводили с первой инъекцией ЧХУ пятикратного (с 24-часовым интервалом) внутрибрюшинно из рас-чета 5 мг/кг белка. Полученную культуральную жид-кость ФБ (КЖФБ) вводили внутрибрюшинно в объеме 5 мг/кг крысам с ОТПП, одновременно с первой инъ-екцией ЧХУ.Для получения белков из 50-100 мл культуральной жидкости их осаждали равным объемом 10% трухук-сусной кислоты, образовавшийся осадок отделяли цен-трифугированием в течение 20 мин. при 1500 g. После отделения надосадка, осадок разводили в физиологи-ческом растворе и диализовали в двух сменах фос-фатно-солевого буфера рН 7,2-7,4 в течение 18 часов. После определения концентрации белка и доведения его 0,9% раствором хлористого натрия до 5 мг/мл, по-лученный раствор фильтровали через стерилизацион-ны...