Alteraciones de la morfología dendrítica neuronal en la corteza cerebral de ratones infectados con rabia: un estudio con la técnica de Golgi

Abstract

Introducción. Los signos neurológicos de la rabia son impresionantes; no obstante, el cerebro infectado sufre apenas cambios histológicos muy sutiles. Objetivo. Estudiar la morfología neuronal mediante la técnica de Golgi, en la corteza cerebral de ratones infectados con el virus de la rabia. Materiales y métodos. Se inocularon ratones con virus silvestre de la rabia (virus 'calle') de origen canino o con virus adaptado (virus 'fijo') de la cepa CVS (challenge virus standard). Los animales se sacrificaron en la fase terminal de la enfermedad y se fijaron por perfusión con paraformaldehído. Los cerebros se procesaron con la técnica de Golgi, se obtuvieron cortes coronales de la corteza, se contaron las neuronas impregnadas en un área de 1 mm 2 , se midió el tamaño de sus cuerpos celulares y se tomaron fotografías en diferentes planos de profundidad. Resultados. Se observaron alteraciones morfológicas notables en el soma y las dendritas de neuronas piramidales, con pérdida acentuada de espinas, en 12,9% de neuronas corticales de animales infectados con virus 'calle' por vía intracerebral; en 8,2% de neuronas de ratones inoculados con este mismo virus por la ruta intramuscular y en 31,8% de neuronas en los animales inoculados con virus 'fijo' por vía intramuscular. Además, en las muestras de material infectado el número de neuronas impregnadas por la técnica de Golgi fue considerablemente menor al observado en las muestras no infectadas. Conclusiones. Estos resultados son evidencia de que el virus de la rabia sí puede inducir daño neuronal estructural. Además, esta infección aparentemente interfiere con los mecanismos de impregnación argéntica del método de Golgi.Palabras clave: rabia, virus de la rabia, corteza cerebral, neuronas, neuroanatomía, técnicas histológicas. Neuronal dentritic morphology alterations in the cerebral cortex of rabies-infected mice: a Golgi studyIntroduction. The neurological signs of rabies are very dramatic. Nevertheless, the infected brain manifests only very subtle histological changes. Objective. The neuronal morphology in the cerebral cortex of rabies-infected mice was examined by means the Golgi technique for detection of neuropathy. Materials and methods. Two groups of mice were inoculated with rabies-one with street virus isolated from an infected dog and the second with fixed CVS (challenge virus standard) virus. At the terminal phase of illness, the animals were sacrificed and fixed for histological staining by perfusion with paraformaldehyde. Next, the brains were treated by the Golgi technique and coronal sections were obtained. Neurons enclosed within 1 mm 2 frames of the frontal cortex sections were counted and the sizes of the cellular bodies were measured. Photographs of several depth levels from the sections were obtained. Results. Cortical pyramidal neurons showed distinctive morphological alterations in the soma and dendrites (including loss of dendritic spines) in 12.9% of cells from intracerebral infectedmice with street virus; in 8.2% of neurons from intramuscular inf...

Estandarización de un protocolo para la combinación de técnicas neurohistológicas en cortes obtenidos con vibrátomo

“…Este material biológico correspondía al archivo de muestras del laboratorio conservadas en solución tamponada de paraformaldehído al 4 % (a 4 °C), correspondientes a trabajos anteriores llevados a cabo por el grupo y que contaban con el aval del Comité de Ética del Instituto Nacional de Salud (5,8,12,13).…”

“…Entre éstos, se encuentran los métodos de plata reducida, las tinciones para mielina, las impregnaciones argénticas y las técnicas citoquímicas e inmunohistoquímicas. Algunos de estos métodos no hacen parte de los protocolos rutinarios en los laboratorios de diagnóstico neurohistopatológico, pero sí se utilizan para la investigación en neurociencias (5)(6)(7)(8).…”

Efecto de la degradación post mórtem sobre la detección inmunohistoquímica de antígenos en el cerebro de ratón

“…Ejemplo de ello es la producción de anticuerpos contra las proteínas Por otra parte, los autores del presente trabajo tienen como principal línea de investigación el estudio de la vulnerabilidad selectiva neuronal de la infección con el virus de la rabia. Se ha demostrado el efecto de la infección sobre la expresión de proteínas (6,20), los neurotransmisores (21,22) y la estructura neuronal (23). Estos resultados se han obtenido en un modelo animal en el cual se evita la descomposición post mórtem mediante la fijación del tejido por perfusión intracardiaca con aldehído.…”

Elaboración y evaluación de un antisuero para la detección inmunohistoquímica del virus de la rabia en tejido cerebral fijado en aldehídos

“…En nuestro laboratorio hemos estado desarrollando una línea de investigación enfocada a estudiar la vulnerabilidad neuronal a la infección con el virus rábico en un modelo de ratón, mediante el estudio de marcadores neuronales específicos y la estructura celular de los diferentes tipos de neuronas (6)(7)(8)(9)(10). La metodología de investigación requiere de material fijado en aldehídos que preserve tanto la morfología como la inmunorreactividad de los marcadores.…”

“…Por esta razón, fue necesario elaborar un antisuero antirrabia y evaluar su efectividad en cerebros infectados y preservados en soluciones de aldehídos. Esto incluía la necesidad de probar su utilidad en diferentes condiciones experimentales y con los diferentes tipos de virus utilizados para la investigación en nuestro laboratorio, a saber, el virus obtenido a partir del tipo silvestre que circula en la naturaleza (virus calle) y el virus adaptado en laboratorio después de pases sucesivos (virus fijo) (6,9,12).…”