Análise automatizada da frequência de micronúcleos em culturas celulares expostas a agentes genotóxicos físicos e quimícos

Abstract

AgradecimentosFIM. É com muito alívio e felicidade que eu encerro este trabalho, que misturou todos os tipos sentimentos: felicidade, frustação, tensão, empolgação, determinação... enfim, persisti e consegui. Só quem faz pósgraduação sabe a emoção de conquistar um título.Meu primeiro agradecimento vai para minha família e amigos, que me apoiaram e acreditaram em mim. Ao Centro de Radiofarmácia IPEN/CNEN-SP, por fornecer os fármacos estudados, em especial ao Dr Luis Alberto Pereira Dias, que se disponibilizou a avaliar meu trabalho. Ao Centro de Biotecnologia, que me acolheu e hoje somos uma família incrível. Em especial, meu grupo de Radiobiologia, que me deu suporte e me ajudaram nos momentos mais difíceis. Obrigada, Kleicy Cavalcante Amaral e Letícia Bonfim, sem a ajuda de vocês eu não teria terminado com essa energia boa. Ao Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares, pela estrutura e apoio. À CAPES pelo apoio financeiro. E por último e mais especial, agradeço meu orientador Dr Daniel Perez Vieira, que acreditou no meu potencial e me ajudou do começo ao fim, me dando a motivação necessária para seguir de cabeça erguida.MUITO OBRIGADA!!! Resumo CARVALHO, Luma R. Análise automatizada da frequência de micronúcleos em culturas celulares expostas a agentes genotóxicos físicos e químicos. 2019. 55 p. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) -Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares -IPEN -CNEN. São Paulo. O ensaio de frequência de micronúcleos é uma técnica importante utilizada para avaliar danos genotóxicos de agentes químicos ou físicos (como radiação ionizante) em células, baseado na quantificação de células contendo micronúcleos, que são fragmentos derivados de DNA danificado com coloração semelhante ao dos núcleos principais, mas com 5 a 30% do seu tamanho. Tradicionalmente, este ensaio é realizado usando microscopia de coloração convencional de acordo com Giemsa, mas atualmente esta técnica está sendo atualizada para uma abordagem automatizada que se baseia na dissolução da membrana plasmática por detergentes levando em conta apenas núcleos e micronúcleos com seu DNA corados por corantes fluorescentes, que pode discriminar núcleos de células viáveis dos das células inviáveis e permite a contagem por citometria de fluxo. Este trabalho avaliou a extensão de dano genotóxico radioinduzido por radiação gama ( 60 Co) em doses entre 0,5 e 16Gy, e o potencial genotóxico de três peptídeos utilizados em medicina nuclear (PSMA-617, PSMA-11 e Ubiquicidina 29-41). As membranas celulares foram lisadas na presença dos corantes SYTOX ® Green e EMA, e núcleos marcados com os dois fluorocromos foram considerados provenientes de células inviáveis e, portanto, removidos da análise. As quantidades de micronúcleos (porcentagem de eventos) nas amostras, foram proporcionais às doses de radiação, e puderam ser ajustadas a um modelo linear-quadrático (R² = 0,993). Somente doses mais altas (8 e 16 Gy) e controles positivos induziram aumentos relevantes nas quantidades de micronúcleos. Os radiofármacos foram testados com co...

Pressing extraction and physico-chemical characterization of seed oil and cake of Jatropha curcas L.

“…The oil extracted from the grains was analyzed for physico-chemical properties by standardized methods: saponification value (Carvalho et al, 2002), dry and volatile matter and impurity index in ether (Instituto Adolfo Lutz, 2008).…”

“…The peroxide index was measured with a solution of acid acetic: chloroform (3:2) and saturated potassium iodide solution. Titration was performed with a sodium thiosulphate solution (0.01 N) (Carvalho et al, 2002).…”

Avaliação do estresse oxidativo e estado redox mitocondrial na interação de células neoplásicas com polímeros arborescentes transportadores de selênio

“…Tradicionalmente, este ensaio é realizado usando microscopia de coloração convencional de acordo com Giemsa, mas atualmente esta técnica está sendo atualizada para uma abordagem automatizada que se baseia na dissolução da membrana plasmática por detergentes levando em conta apenas núcleos e micronúcleos com seu DNA corados por corantes fluorescentes, que podem discriminar núcleos de células viáveis das células inviáveis e permitir a contagem por citometria de fluxo [112]. Nesse ensaio, as membranas celulares foram lisadas na presença dos corantes SYTOX® Green e EMA.…”