Micronucleus (MN) assay constitutes a valuable surrogate to the chromosome aberration technique for in vitro testing of the genotoxicity of substances. As test substances, two peptidic compounds (DOTATATE and Ubiquicidin) used in nuclear medicine, were tested for in vitro cytotoxicity and genotoxicity in CHO-K1 cells. None of the compounds showed detectable cytotoxicity (0.5-7.3 ng/mL for DOTATATE and 0.3-4.5 ng/mL for UBI), genotoxicity (0.72, 7.2 and 72.0 ng/ml for DOTATATE and 0.45, 4.5 and 45.0 ng/mL for UBI) or cell cycle changes as compared to untreated controls at the concentrations tested. Statistical analysis showed good concordance between two independent analysts. The results corroborate the notion of the safety of the compounds and present improvements of the in vitro MN assay when performed in a pre-clinical trial context that increase the throughput of small-to-medium testing facilities as an alternative to high content screening systems.

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AgradecimentosFIM. É com muito alívio e felicidade que eu encerro este trabalho, que misturou todos os tipos sentimentos: felicidade, frustação, tensão, empolgação, determinação... enfim, persisti e consegui. Só quem faz pósgraduação sabe a emoção de conquistar um título.Meu primeiro agradecimento vai para minha família e amigos, que me apoiaram e acreditaram em mim. Ao Centro de Radiofarmácia IPEN/CNEN-SP, por fornecer os fármacos estudados, em especial ao Dr Luis Alberto Pereira Dias, que se disponibilizou a avaliar meu trabalho. Ao Centro de Biotecnologia, que me acolheu e hoje somos uma família incrível. Em especial, meu grupo de Radiobiologia, que me deu suporte e me ajudaram nos momentos mais difíceis. Obrigada, Kleicy Cavalcante Amaral e Letícia Bonfim, sem a ajuda de vocês eu não teria terminado com essa energia boa. Ao Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares, pela estrutura e apoio. À CAPES pelo apoio financeiro. E por último e mais especial, agradeço meu orientador Dr Daniel Perez Vieira, que acreditou no meu potencial e me ajudou do começo ao fim, me dando a motivação necessária para seguir de cabeça erguida.MUITO OBRIGADA!!! Resumo CARVALHO, Luma R. Análise automatizada da frequência de micronúcleos em culturas celulares expostas a agentes genotóxicos físicos e químicos. 2019. 55 p. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) -Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares -IPEN -CNEN. São Paulo. O ensaio de frequência de micronúcleos é uma técnica importante utilizada para avaliar danos genotóxicos de agentes químicos ou físicos (como radiação ionizante) em células, baseado na quantificação de células contendo micronúcleos, que são fragmentos derivados de DNA danificado com coloração semelhante ao dos núcleos principais, mas com 5 a 30% do seu tamanho. Tradicionalmente, este ensaio é realizado usando microscopia de coloração convencional de acordo com Giemsa, mas atualmente esta técnica está sendo atualizada para uma abordagem automatizada que se baseia na dissolução da membrana plasmática por detergentes levando em conta apenas núcleos e micronúcleos com seu DNA corados por corantes fluorescentes, que pode discriminar núcleos de células viáveis dos das células inviáveis e permite a contagem por citometria de fluxo. Este trabalho avaliou a extensão de dano genotóxico radioinduzido por radiação gama ( 60 Co) em doses entre 0,5 e 16Gy, e o potencial genotóxico de três peptídeos utilizados em medicina nuclear (PSMA-617, PSMA-11 e Ubiquicidina 29-41). As membranas celulares foram lisadas na presença dos corantes SYTOX ® Green e EMA, e núcleos marcados com os dois fluorocromos foram considerados provenientes de células inviáveis e, portanto, removidos da análise. As quantidades de micronúcleos (porcentagem de eventos) nas amostras, foram proporcionais às doses de radiação, e puderam ser ajustadas a um modelo linear-quadrático (R² = 0,993). Somente doses mais altas (8 e 16 Gy) e controles positivos induziram aumentos relevantes nas quantidades de micronúcleos. Os radiofármacos foram testados com co...

The micronucleus assay is an important technique used to evaluate genotoxic damage of chemical or physical agents (as ionizing radiations) on cells, based on quantification of cells bearing micronuclei, which are fragments derived from damage (breakage) of the DNA. Currently, this technique was updated to an automated approach that relies on plasma membrane dissolution to analyze fluorescent dye-labelled nuclei and micronuclei by flow cytometry. Cell suspensions were irradiated in PBS by a 60Co source in doses between 0 and 16 Gy, and incubated by 72h. Cell membranes were lysed in the presence of SYTOX Green and EMA dyes, so EMA-stained nuclei could be discriminated as from dead cells, and nuclei and micronuclei could be quantified. Amounts of micronuclei (percent of events) in the samples, were found to be proportional to radiation doses, and could be fitted to a linear-quadratic model (R² = 0.993). Only higher doses (8 and 16 Gy) and positive control could induce relevant increases in micronucleus amounts. The incorporation EMA showed an increase in irradiated cells. Mid- to high doses (4, 8 and 16 Gy) induced reduction of cell proliferation. Experiments showed the suitability of the technique to replace traditional microscopy analysis in evaluation of the effects of ionizing radiations on cells, with possibility to use in biological dosimetry.