Application of fluorescent in situ hybridization with X and Y chromosome specific probes to buccal smear analysis

Abstract

Conventional X- and Y-chromatin and fluorescent in situ hybridization (FISH) analysis based on X- and Y-chromosome specific probes were conducted from buccal smear, on 15 normal males, 15 normal females, and 9 cases suspected of sex chromosome anomalies. The proportion of X- and Y-chromatin in normal females and males was 12% +/- 3% and 51.5% +/- 4.9%, respectively, by the conventional X- and Y-chromatin procedure. The CEP-X/Y analysis by FISH for the same specimens provided a proportion of 98.8% +/- 0.7% cells with XX signals in the normal females and 99.8% +/- 0.4% cells with XY signals in the normal males. The FISH method was superior to the conventional procedure in nine cases suspected of sex chromosome anomalies, including one case of mosaicism. The results of CEP-X/Y will sometimes be false; it will not detect structural anomalies of sex chromosomes, and it is not intended to detect low level mosaicism. However, the test is useful for rapid screening of sex chromosome aneuploidy at a fraction of the cost for chromosome analysis. The FISH test is also appropriate to detect tissue specific sex chromosome mosaicism, especially if it is relatively high. This FISH test is best used as an adjunct to chromosome analysis whenever possible.

Uso da FISH em mucosa oral para investigação de mosaicismo com linhagem 45,X: estudo com homens saudáveis e pacientes com distúrbios da diferenciação do sexo

“…O sinal da sonda pode não ser visualizado, por exemplo, por sobreposição de células ou dobramento dos núcleos. No único estudo semelhante encontrado na literatura, foram analisados 200 núcleos de muco sa oral de 15 homens e 15 mulheres saudáveis e nove pacientes com diversos quadros clínicos (22). Os auto res determinaram um limite superior de 1% de núcleos anômalos nos indivíduos do sexo masculino e conside raram a FISH em mucosa oral um exame sensível para diagnóstico de mosaicismo de cromossomos sexuais.…”

Investigação clínica e genética em meninas com baixa estatura idiopática

“…É conhecido na literatura que perdas espontâneas dos cromossomos sexuais podem ocorrer em culturas in vitro mesmo em preparações sem cultura celular (32). Seu crescimento vem se mantendo com 2,9 DP abaixo da média de altura para meninas da mesma idade, independente do desenvolvimento puberal normal para a idade.…”

“…(32). Estes autores, estudando células de mucosa oral em controles masculinos e femininos e em portadores de…”

“…Esta técnica utiliza sondas de DNA marcadas com haptenos, que identificam segmentos cromossômicos de cópia única, segmentos com seqüên-cias repetitivas (como as regiões centroméricas) ou todo o cromossomo (whole chromosome painting -wcp) (29)(30)(31). A técnica permite ainda detectar anomalias numéricas e estruturais dos cromossomos em metáfa-ses, assim como pode ser aplicada em células interfási-cas, sem necessidade de cultura (nuc ish -nuclear in situ hybridization) e em preparações citológicas diversas (32)(33)(34), como as células de mucosa oral. Em crianças com baixa estatura e com cariótipo normal em sangue periférico, o estudo com sondas alfa centroméricas de X e Y nas preparações de mucosa oral permite identificar mosaicismos crípticos (32,34).…”

“…A técnica permite ainda detectar anomalias numéricas e estruturais dos cromossomos em metáfa-ses, assim como pode ser aplicada em células interfási-cas, sem necessidade de cultura (nuc ish -nuclear in situ hybridization) e em preparações citológicas diversas (32)(33)(34), como as células de mucosa oral. Em crianças com baixa estatura e com cariótipo normal em sangue periférico, o estudo com sondas alfa centroméricas de X e Y nas preparações de mucosa oral permite identificar mosaicismos crípticos (32,34).…”