O presente estudo teve como objetivo avaliar a eficácia de um novo produto elaborado a base de óleo essencial de alecrim pimenta sob a redução da contagem de microrganismos presentes na pele de tetos de vacas leiteiras. Para o teste in vivo, avaliou-se a eficácia do novo produto sob a antissepsia de negativos para mastite clínica (192 tetos), em comparação ao tratamento que continha produtos comerciais (192 tetos), durante um período de 42 dias. Os tetos foram diariamente acompanhados clinicamente, havendo semanalmente avaliação da microbiota presente na pele dos mesmos quanto à redução na contagem de Staphylococcus aureus, Estafilococos coagulase negativo (ECN), Echerichia coli e aeróbios mesófilos. Os dois produtos mantiveram a integridade dos tetos, sendo observado ausência de mastite clínica durante o período experimental. Não observou-se diferença significativa na ocorrência de mastite subclínica e de microrganismos nos tetos dos dois grupos em estudo pelo teste de Fisher em nível de significância de 5%. Ao comparar a redução Log da contagem em UFC.mL-1 dos microrganismos para o grupo tratado com produto convencional e com produto experimental para aeróbios mesófilos, E. coli, S. aureus e Estafilococos coagulase negativa, obtidos com o processo de higienização dos tetos foi observada diferença estatística(p>0,05), na contagem de microrganismos, evidenciando que ambos apresentaram efeito semelhante ao controle de microrganismos presentes na pele dos tetos. Sendo assim, o novo produto contendo óleo essencial de alecrim pimenta apresentou eficácia semelhante ao produto convencional clorexidine e iodo para antissepsia dos tetos de vacas leiteiras sem promover reações locais na pele, podendo este vir a ser utilizado como produto alternativo no manejo de ordenha.