Os membros da Comissão Examinadora acima assinaram a Ata de Defesa, que se encontra no processo de vida acadêmica da aluna.
RESUMOO ecossistema formado pela interação entre plantas e solo é composto por uma imensa diversidade de microorganismos que desafiam abordagens de estudos quanto as suas características e mecanismos de associação. Métodos tradicionais de isolamento, cultivo e identificação de microorganismos em coleções são laboriosos, de alto custo e consumem grande parcela de tempo. Neste trabalho utilizamos amostras de raiz, rizosfera e colmo da cana-deaçúcar para obtenção dos microorganismos associados. A partir disso, descrevemos uma nova metodologia para construção de uma coleção de microorganismos representativa do microbioma da cana-de-açúcar baseado em um sistema de obtenção de culturas. Este método é baseado em picar colônias de placas de cultura que podem conter um ou múltiplos microorganismos, armazenando-as em placas de 96 poços. Foram usados diferentes meios de cultura, suplementação com xarope de cana-de-açúcar e diferentes temperaturas de incubação em estufa para obtenção de uma ampla diversidade de microorganismos. A coleção completa é composta de 56 placas de 96 poços. Para identificação das bactérias presentes na coleção, foi desenvolvido um sistema multiplex para a amplificação do gene correspondente ao RNA ribossomal 16S constituído por duas etapas de amplificação por PCR com primers contendo barcodes para placas, linhas e colunas que permitiram identificar e rastrear o conteúdo bacteriano de cada poço independentemente do mesmo conter um ou múltiplos microorganismos. O sistema multiplex permite o agrupamento dos amplicons em um único tubo. O sequenciamento foi feito através da plataforma PacBio e permitiu a obtenção de sequências de tamanho quase completo do gene 16S que permitiu uma identificação acurada de cada poço. Comparando os dados obtidos para a coleção de microorganismos (dependente de cultivo) com o perfil do microbioma da cana (independente de cultivo) conseguimos obter 399 bactérias cultivadas que representam 15,9% do microbioma core da rizosfera e 61,6-65,3% dos representantes do microbioma core de colmo. Os resultados mostram que a metodologia utilizada para construção da coleção de microorganismos teve êxito em nosso objetivo de propor uma nova abordagem para obtenção de microorganismos benéficos para plantas a partir de seu microbioma.