Automated sanger DNA sequencing with one label in less than four lanes on gel

Ansorge, W.; Voß, H.; Wirkner, Ute; Schwager, Christian; Stegemann, J.; Pepperkok, Rainer; Zimmermann, Jürgen; Erfle, Holger

doi:10.1016/0165-022x(89)90080-8

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“…Diversas variantes desta técnica foram criadas com diferentes aplicações, sendo particularmente utilizadas as técnicas de PCR em tempo real para a quantificação da expressão gênica, quantificação de agentes patogênicos e detecção de polimorfismos de nucleotídeos únicos. Na área de sequenciamento de ácidos nucleicos, a primeira mudança que ocorreu foi o desenvolvimento de sequenciadores automatizados de DNA que determinavam a sequência de ácidos nucleicos a partir da leitura de fluorescências emitidas pelas bases nitrogenadas modificadas incorporadas (23 …”

Section: Usando Dados De Difração De Raios -X Assim Como Outros Dadounclassified

Estudos moleculares sobre o vírus da hepatite B

Pinho¹

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EPIDEMIOLOGIA DA HEPATITE B NO BRASIL E NO MUNDOA hepatite B é uma doença de distribuição universal, presente em todos os continentes, porém com variações nos níveis de endemicidade. A Organização Mundial de Saúde estima que cerca de 2 bilhões de pessoas tenham sido infectadas pelo HBV O HBV é transmitido principalmente através do sangue, mas outros fluidos como sêmen, secreções vaginais e saliva podem estar envolvidos na transmissão desse agente. Há três principais formas de transmissão do HBV: vertical, sexual e parenteral (7).Nas áreas com prevalência intermediária ou alta a maioria dos indivíduos se infecta no momento do nascimento (transmissão vertical) ou durante os primeiros anos da infância pelo contato com portadores do vírus, o que ocorre com mais frequência entre membros da mesma família. Já nas áreas de baixa prevalência a infecção é adquirida primariamente durante a vida adulta, principalmente pela via sexual (33, 34).Em geral, quando a infecção pelo HBV ocorre em indivíduos adultos, a mesma tende a evoluir para a cronicidade em cerca de 5% dos indivíduos infectados. ESTRUTURA DO HBVAs células infectadas pelo HBV produzem diferentes tipos de partículas relacionadas ao vírus, as quais podem ser identificadas por microscopia eletrônica no PROTEÍNAS VIRAIS ANTÍGENOS DE SUPERFÍCIE (ENVELOPE)O principal antígeno do envelope do HBV é o HBsAg, mas também encontramos as proteínas L ("large") e M ("medium"), que contém os antígenos correspondentes às regiões pré S1 e pré S2 do genoma viral, além de compartilharem as regiões antigênicas do HBsAg. O HBsAg é encontrado no envelope viral em sua forma não -glicosilada (p25) e glicosilada (gp29), a proteína M em duas formas glicosiladas (gp33 e gp36) e a proteína L em uma forma não -glicosilada (p39) e outra glicosilada (gp42) (60).A principal proteína do envelope do HBV é denominada de HBsAg, é altamente imunogênica e é a base da vacina utilizada contra a infecção pelo HBV, que inicialmente consistia em HBsAg isolado do plasma de indivíduos infectados e atualmente são utilizadas proteínas HBs purificadas produzidas por engenharia genética. Os anticorpos anti-HBs gerados pela vacinação ou que constituem a imunoglobulina hiperimune são predominantemente dirigidos contra um epítopo antigênico presente no HBsAg denominado de determinante "a" (59, 61).As proteínas L e M estão presentes em maior proporção nas partículas virais íntegras e partículas ocas cilíndricas e têm um papel fundamental na infecção pelo HBV, participando no processo de captação do vírus pelas células hepáticas e do processo de morfogênese da partícula viral (62).As proteínas L, M e S compartilham um domínio na extremidade carboxila com quatro hélices putativas para ancoragem na membrana. As duas extensões terminais ANTÍGENO HBx (HBxAg)Além destas proteínas, pelo menos duas outras são produzidas pelo HBV, oHBxAg e a DNA polimerase viral. A presença da proteína HBxAg foi inferida pela descoberta de uma fase de leitura aberta na sequência do genoma viral.Posteriormente, a clonagem de segmentos des...

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Section: Usando Dados De Difração De Raios -X Assim Como Outros Dadounclassified

Estudos moleculares sobre o vírus da hepatite B

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“…In theory, this primer walking process can be repeated many times to sequence extensive tracts of DNA. However, its use is generally limited to smaller projects because the successive rounds of sequence analysis, primer design, and primer synthesis are too expensive and time-consuming (ANSORGE et al, 1997).…”

Section: New Sequence Determinationmentioning

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“…DNA in this form can be purified directly from viruses such as bacteriophage M13 which have single-stranded genomes. On the other hand, double-stranded DNA such as a plasmid vector containing the target insert must first be converted to the single-stranded form either by alkali or heat denaturation prior to sequencing (CHEN and SEEBURG, 1985;ANSORGE et al, 1997).…”

Section: Dna Template Preparationmentioning

confidence: 99%

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Sequencing Technology

et al. 2001

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“…• those using separation methods, like for example gel electrophoresis [1,2], capillary electrophoresis [3,4], mass spectrometry [5,6] or high performance liquid chromatography separation [7]; • those using homogenous (in solution) assays, like for example 5 nuclease assay [8], Invader [9], and molecular beacons [10,11]; • those using solid-phase assays, for example beads and DNA arrays.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%