Avaliação do dano oxidativo ao DNA de células normais e neoplásicas da mucosa cólica de doentes com câncer colorretal

Ribeiro, Marcelo Lima; Priolli, Denise Gonçalves; Miranda, Daniel Duarte da Conceição; Paiva, Demétrius Arçari; Júnior, José Pedrazzoli

doi:10.1590/s0101-98802007000400005

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“…With the advent of alkaline gel electrophoresis (comet assay), it has become possible to quantify the level of oxidative stress in a single cell. The comet assay allows the measurement of the ROS in small fragments of tissue, enabling the comparative study of cells in normal and inflamed colonic mucosa, and even cells in different stages of colorectal carcinogenesis 23,45 . The comet assay is a rapid, sensitive and relatively simple method for detecting oxidative DNA damage at the level of individual cells.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

“…It combines the simplicity of biochemical techniques for detecting DNA single strand breaks (strand breaks and incomplete excision repair sites), alkali-labile sites, and cross-linking 12,13 . The method recognizes oxidized bases and has been used to determine levels of oxidative DNA damage, which has been implicated in several health conditions 12,13,20,23,24,25,45 . The results of this study confirmed that a change in cellular energy substrate is able to cause the development of colitis.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

“…Cells from colon biopsies were isolated as described 23 . Briefly, the biopsies were pooled and incubated with 5.5 mg proteinase K (Sigma-Aldrich) and 4 mg collagenase I (Invitrogen Life Technologies, Grand Island, N.Y., USA) in 3 ml Hank's balanced salt solution (HBSS) for 45 min at 37ºC to free the cells; the cells were then resuspended in 10 ml HBSS.…”

Section: Dna Damage Assessed By Comet Assaymentioning

confidence: 99%

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The importance of oxygen free radicals in the etiopathogenesis of diversion colitis in rats

et al. 2010

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Purpose: Quantify the levels of oxidative DNA damage of epithelial colon cells comparing segments with and without fecal stream. Methods: Sixty Wistar rats were subjected to deviation of fecal stream by proximal colostomy and a distal mucosal fistula. Animals were divided into three experimental groups that were sacrificed 6, 12 and 24 weeks after surgery. In each experimental group, five animals underwent laparotomy without intestinal deviation (sham subgroup). The diagnosis of colitis was made by histopathological analysis and the inflammatory activity index by graduated scale. The neutrophil infiltration was determined by myeloperoxidase tissue levels and the intensity of oxidative DNA damage by comet assay. The Mann-Withney and Student t test were used to compare the results among experimental subgroups and the Kruskal-Wallis test for variance analysis, adopting a significance level of 5% (p<0.05). Results: Colon segments without fecal stream was shown higher histological inflammatory score of the colon wall after 12 and 24 weeks (p=0.001) that increased with the time of diversion (p=0.01). The activity of myeloperoxidase in segments without fecal stream decreased with the time (p=0.001). Oxidative DNA damage levels were significantly higher in the segments without fecal stream, (p=0.0001), independent of time of colon diversion, and increase with the time (p=0.0007). Conclusions: Colon segments without fecal stream showed high levels of oxidative DNA damage related to histological alterations observed in diversion colitis. The levels of oxidative DNA damage in segments devoid of the fecal stream increase with the time of intestinal exclusion. Key words: Colitis. Colostomy. DNA Damage. Oxidative Stress. Comet Assay. Fatty Acids, Volatile. Rats. RESUMOObjetivo: Quantificar os níveis de dano oxidativo ao DNA em células epiteliais da mucosa cólica comparando segmentos com e sem trânsito fecal. Métodos: Sessenta ratos Wistar foram submetidos à derivação do trânsito intestinal por colostomia proximal e fístula mucosa distal. Os animais foram divididos em três grupos experimentais segundo terem sido sacrificados 6, 12 e 24 semanas após a cirurgia. Em cada grupo experimental, cinco animais foram submetidos à laparotomia isolada sem derivação fecal (grupo sham). O diagnóstico de colite foi estabelecido por análise histopatológica e o índice de atividade inflamatória por escala graduada. A infiltração neutrofílica foi determinada pelos níveis teciduais da mieloperoxidase e a intensidade do dano oxidativo ao DNA pelo ensaio em cometa. Utilizaram-se os testes de Mann-Withney e o teste t de Student para comparar os resultados encontrados entre os subgrupos experimentais e o teste de Kruskal-Wallis para análise de variância, adotando-se nível de significância de 5% (p<0,05). Resultados: Os segmentos cólicos, sem trânsito fecal apresentaram maior escore histológico de inflamação após 12 e 24 semanas (p=0,001), que aumentou com o tempo de derivação (p=0,01). A atividade da mieloperoxidase nos segmentos sem trânsito...

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Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Section: Dna Damage Assessed By Comet Assaymentioning

confidence: 99%

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The importance of oxygen free radicals in the etiopathogenesis of diversion colitis in rats

et al. 2010

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“…10,13,19,20,21,22,27,33 A relação entre estresse oxidativo, inflamação, pólipos adenomatosos e câncer torna-se evidente quando se demonstrou níveis elevados de dano oxidativo ao DNA em células da mucosa cólica de doentes com retocolite ulcerativa inespecífica de longa duração e que desenvolveram displasias de alto grau e CCR. 10,16,33,34 Poucos estudos avaliaram os níveis de estresse oxidativo ao DNA, com o ensaio do cometa, comparando tecidos normais e neoplásicos em doentes com CCR. 22,28,35 Esses estudos mostraram níveis duas vezes mais elevados de 8-OHdG no tecido neoplásico comparado ao tecido normal.…”

Section: Discussionunclassified

Avaliação da expressão tecidual do gene de reparo MLH1 e dos níveis de dano oxidativo ao DNA em doentes com câncer colorretal

Cordeiro

Priolli

Miranda

et al. 2009

Rev bras. colo-proctol.

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O dano oxidativo ao DNA provocado por radicais livres de oxigênio representa um dos principais mecanismos responsáveis pelas etapas iniciais da carcinogênese colorretal. O estresse oxidativo ocasiona erros de pareamento de bases possibilitando o aparecimento de mutações em genes controladores do ciclo celular. As células possuem um sistema de defesa representado pelos genes de reparo do DNA que corrigindo os erros de pareamento impedem o desenvolvimento de mutações. Poucos estudos avaliaram a relação entre dano oxidativo ao DNA e a expressão tecidual do gene de reparo MLH1. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi avaliar os níveis de estresse oxidativo ao DNA e a expressão tecidual do gene de reparo MLH1 nas células da mucosa cólica normal e neoplásica de doentes com câncer colorretal. MATERIAL E MÉTODO: Foram estudados 44 doentes com diagnóstico de adenocarcinoma colorretal. Foram excluídos os doentes com câncer colorretal hereditário, portadores de câncer relacionado às doenças inflamatórias intestinais e os submetidos à radioquimioterapia neoadjuvante. Para a avaliação dos níveis de dano oxidativo ao DNA utilizou-se a técnica da eletroforese alcalina em gel de célula isolada (ensaio do cometa) avaliando 100 células obtidas dos tecidos normal e neoplásico. Para a avaliação da expressão do gene MLH1 utilizou-se a técnica de reação de polimerase em cadeia em tempo real (RT-PCR) com primer especificamente desenhados para amplificação do gene. A comparação dos resultados encontrados para os níveis de estresse oxidativo ao DNA, e expressão do gene MLH1 nos tecidos normais e neoplásicos foi feito pelo teste t de Student, adotando-se nível de significância de 5% (p<0,05). RESULTADOS: Os níveis de dano oxidativo ao DNA no tecido neoplásico foram significativamente mais elevados quando comparados ao tecido normal (p=0,0001). A expressão tecidual do gene MLH1 no tecido neoplásico foi significativamente menor quando comparado ao tecido normal (p=0,02). CONCLUSÃO: O gene de reparo MLH1 encontra-se menos expresso no tecido neoplásico e inversamente relacionado aos níveis de dano oxidativo ao DNA.

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“…In a study comparing the intestinal mucosa of healthy individuals with those of colorectal cancer patients, the levels of oxidative damage to the DNA were shown to be significantly higher in the patients with the neoplasm. Interestingly, the normal tissue also had some level of oxidative damage, demonstrating the importance of ROS in the initial aggression to the intestinal mucosa (RIBEIRO et al, 2007). Another study demonstrated the presence of oxidative stress in women with breast cancer through the evaluation of TAC levels, which were lower than the levels found in healthy women.…”

Section: Biomarkers Of Oxidative Stressmentioning

confidence: 98%

Oxidative stress in dogs

Russo

Bracarense

2016

SCA

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Reactive oxygen species (ROS), also known as free radicals, are generated during cellular respiration. Under normal conditions, the body has the ability to neutralize the effects of free radicals by using its antioxidant defenses. In the case of an imbalance between oxidants and antioxidants, free radical production exceeds the capacity of organic combustion, resulting in oxidative stress. Of all the cellular components compromised by the harmful effects of ROS, the cell membrane is the most severely affected owing to lipid peroxidation, which invariably leads to changes in the membrane structure and permeability. With lipid peroxidation of the cell membrane, some by-products can be detected and measured in tissues, blood, and other bodily fluids. The measurement of biomarkers of oxidative stress is commonly used to quantify lipid peroxidation of the cell membrane in humans, a species in which ROS can be considered as a cause or consequence of oxidative stress-related diseases. In dogs, few studies have demonstrated this correlation. The present review aims to identify current literature knowledge relating to oxidative stress diseases and their detection in dogs. Key words: Oxidative stress. Lipid peroxidation. Free radicals. Dogs. ResumoNos processos decorrentes da respiração celular, são gerados produtos denominados espécimes reativos de oxigênio (EROS), conhecidos também como radicais livres. Em condições normais, o organismo possui capacidade de neutralizar os efeitos dos radicais livres utilizando suas defesas antioxidantes. Em situações de desequilíbrio entre agentes oxidantes e antioxidantes, a produção de radicais livres excede a capacidade orgânica de neutralização, resultando na condição conhecida como estresse oxidativo. Dentre todos os componentes celulares atingidos pelos efeitos nocivos dos EROS, as membranas celulares são as estruturas mais severamente acometidas, devido à peroxidação lipídica, que leva, invariavelmente, a alterações estruturais e também na sua permeabilidade. Na peroxidação lipídica da membrana celular, alguns subprodutos podem ser detectados e mensurados nos tecidos, sangue e outros fluidos corpóreos. A mensuração de biomarcadores de estresse oxidativo é habitualmente utilizada para quantificar a lipoperoxidação da membrana celular em humanos, espécie onde as EROS podem ser consideradas como causa ou consequência de doenças relacionadas ao estresse oxidativo. Nos cães, alguns poucos estudos demonstram essa correlação. A presente revisão tem como principal objetivo verificar na literatura, onde se encontra atualmente o conhecimento relacionando o estresse oxidativo às doenças em cães bem como as possíveis formas de detecção de biomarcadores na espécie canina. Palavras-chave: Estresse oxidativo. Lipoperoxidação. Radicais livres. Cães.

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Avaliação do dano oxidativo ao DNA de células normais e neoplásicas da mucosa cólica de doentes com câncer colorretal

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The importance of oxygen free radicals in the etiopathogenesis of diversion colitis in rats

The importance of oxygen free radicals in the etiopathogenesis of diversion colitis in rats

Avaliação da expressão tecidual do gene de reparo MLH1 e dos níveis de dano oxidativo ao DNA em doentes com câncer colorretal

Oxidative stress in dogs

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