Bacterial host interaction of GFP‐labelled Vibrio anguillarum HI‐610 with gnotobiotic sea bass, Dicentrarchus labrax (L.), larvae

Abstract

The location and cell damage caused by Vibrio anguillarum, the causative agent of classical vibriosis, within the developing gut of the newly hatched sea bass, Dicentrarchus labrax (L.), is unknown. A gnotobiotic sea bass model was used to investigate the early interactions of V. anguillarum with sea bass larvae. In the present study, germ-free sea bass larvae were orally exposed to a V. anguillarum HI-610 pathogen labelled with the green fluorescent protein (GFP-HI-610) and sampled at regular intervals. Pathogenic colonization of gut enterocytes was observed 2 h post-exposure (p.e.) and onwards, whereas bacteria within the swim bladder were visualized 48 h p.e and onwards. Ultrastructural findings demonstrated direct bacterial contact with the host cell in the oesophageal mucosa and putative attachment to microvilli of mid- and hindgut enterocytes. The present findings form a starting point for studies assessing the impact of potential candidates (probiotics, prebiotics, antimicrobial peptides) to mitigate bacterial virulence.

Protocolo para obtencion de alevines axenicos de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss)

“…La ceftazidima y el cloranfenicol fueron preparados según Li et al (1999). Algunos de estos antibacterianos como la ampicilina han sido utilizados en estudios para obtener larvas axénicas de lubina (D. labrax), bacalao común (G. morhua) y tilapia del Nilo (Oreochromis niloticus) Rekecki et al, 2009Rekecki et al, , 2012Forberg et al, 2011;Situmorang et al, 2014). Sin embargo, existen bacterias Gram negativas resistentes a los antibacterianos ampicilina y kanamicina y, además, se ha evidenciado que esta clase de bacterias (Gram negativas), es la que predomina en las ovas de salmónidos, de acuerdo a observaciones realizadas previamente por Romero & Navarrete (2006).…”

“…Se encontró que los cinco aislados bacterianos fueron susceptibles a 10 µg mL -1 de kanamicina, 400 µg mL -1 de ampicilina, 400 µg mL -1 de ceftazidima y 20 µg mL -1 de cloranfenicol (Tabla 1). Según los resultados obtenidos en la prueba de CMI se puede determinar que para obtener alevines axénicos de trucha arcoíris, se necesita el doble o hasta cuatro veces más de antibacteriano (kanamicina y ampicilina) en comparación con la dosis utilizada por otros trabajos para obtener larvas axénicas de algunas especies de cultivo Rekecki et al, 2009Rekecki et al, , 2012Forberg et al, 2011;Situmorang et al, 2014). Con el propósito de lograr la obtención de organismos axénicos, es indispensable realizar un seguimiento en los días posteriores a la eclosión, de la carga bacteriana tanto de alevines como del medio, y mediante la prueba de CMI, estimar la concentración de antibacteriano a administrar para erradicar aquellos microorganismos resistentes (Situmorang et al, 2014).…”

“…Sin embargo, al reintroducir la microbiota en estos peces estos cambios se revertían. Rekecki et al (2009Rekecki et al ( , 2012, cuestionaron la utilización del pez cebra como modelo de estudio para 1064 …”

“…Sin embargo, al reintroducir la microbiota en estos peces estos cambios se revertían. Rekecki et al (2009Rekecki et al ( , 2012, cuestionaron la utilización del pez cebra como modelo de estudio para peces de cultivo, ya que la mayoría de éstos, son marinos y se encuentran filogenéticamente distantes de los peces cebra. Forberg et al (2012), se motivaron para estudiar un protocolo para obtener larvas axénicas de bacalao común (Gadus morhua), logrando desarrollar un sistema de alimentación de las larvas con rotíferos gnotobióticos, que permite ingresar los microorganismos al tracto digestivo y prolongar las fases del estudio en estado gnotobiótico.…”

“…De esta forma, se podrá proponer posibles probióticos que promuevan la protección contra patógenos. Se debe considerar que la trucha arcoíris y otros salmónidos cultivados en Chile tienen un proceso de desarrollo a baja temperatura (8-10ºC), lo cual impone una dificultad adicional dado que la absorción del saco vitelino conlleva mucho más tiempo que en otros modelos y contrasta con los modelos de pez cebra (26ºC; Rawls et al, 2004) y con las investigaciones realizadas en otros peces como la lubina (Dicentrarchus labrax) (16ºC, Rekecki et al, 2012). En salmónidos como la trucha arcoíris (O. mykiss), la absorción del saco vitelino toma entre 50 a 70 días posteclosión, a una temperatura de 10°C, considerada óptima para su desarrollo (Kraus, 1999).…”