Biópsias endometriais de éguas: avaliação imuno-histoquímica e definição de protocolo

Abstract

A imuno-histoquímica é uma importante técnica de diagnóstico e na Medicina Veterinária ainda se faz necessário a realização de testes para padronização dos anticorpos a serem utilizados. O objetivo deste estudo foi avaliar e descrever a imunomarcação de anticorpos anticomponentes celulares e da matriz extracelular humana, como o antivimentina, antidesmina, anti-PCNA, anti-CK20 e antialfa actina de músculo liso, após padronizações na técnica, em amostras de biópsia endometrial de égua. Duas amostras endometriais de vinte éguas foram coletadas. Uma delas foi fixada em formol tamponado a 10% e a outra em Bouin, para processamento e inclusão em parafina e coloração em HE, tricrômico de Gomori, reticulina e imunohistoquímica com os anticorpos citados anteriormente. Ambos fixadores formol tamponado 10% e Bouin não alteraram a imunomarcação dos anticorpos estudados. Com relação à marcação destes, todos reagiram positivamente após as alterações realizadas no protocolo inicial da técnica, como no bloqueio da peroxidase endógena, recuperação antigênica e inibição das ligações inespecíficas com ajustes de tempo e temperatura. Os anticorpos antivimentina e antidesmina marcaram o endotélio dos vasos sanguíneos; o PCNA, o núcleo das células do epitélio em proliferação; o antialfa actina de músculo liso, o contorno dos ductos glandulares endometriais sugerindo miofibroblastos e o CK-20 evidenciou a queratina no epitélio glândular. A imuno-histoquímica da biópsia endometrial pode auxiliar no diagnóstico e prognóstico, fornecendo informações necessárias para uma avaliação minuciosa da capacidade reprodutiva do animal, das fases do ciclo estral e anormalidades hormonais e para a detecção de possíveis agentes patológicos que estejam interferindo na vida reprodutiva.

Expression of proliferating cell nuclear antigen in the endometrium of mares during estrus and at early diestrus

“…Despite the difficulty and necessary care in interpreting PCNA immunostainings (clone PC10), as described by Yu and Filipe (1993) and Martins et al (2011), the cell proliferation distribution pattern observed in the present work was very similar to that described by Gerstenberg, Allen and Stewart (1999). However, Gerstenberg, Allen and Stewart (1999) have assessed the cell proliferation patterns in equine endometrium during the estrous and seasonal cycles, by using the Ki67 immunomarker in frozen sections.…”

“…Initially described by Miyachi, Fritzler and Tan (1978), the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is an auxiliary protein of DNA polymerase d and e, the enzymes that are needed for DNA synthesis (KELMAN, 1997). Expression of PCNA increases during G1 phase of cell cycle, reaches its expression peak in the S phase, and declines during the G2\M phase, and its immunomarking characteristics allow the identification of cells in the different phases of the cycle (WOOD; SHIVIJ, 1997;MARTINS et al, 2011).…”