Caracterização fenotípica e diversidade de bactérias diazotróficas associativas isoladas de solos em reabilitação após a mineração de bauxita

Abstract

RESUMOAs gramíneas, usadas comumente para reabilitação de áreas degradadas, podem formar associações em suas raízes com bactérias fixadoras de nitrogênio e, assim, contribuir para a sustentabilidade do ecossistema. Por outro lado, a diversidade microbiana exerce papel relevante na resiliência dos processos biológicos do solo, que incluem a fixação biológica de N 2 . O presente estudo teve como objetivo a caracterização fenotípica de 72 isolados de bactérias diazotróficas associativas Gram-negativas, oriundos de áreas sob diferentes estratégias de reabilitação, após a mineração da bauxita em Poços de Caldas (MG), por meio da inoculação de amostras de solo nos meios de cultivo NFb, Fam e JNFb. Estirpes tipo e referência de espécies de Azospirillum, Herbaspirillum e Burkholderia foram usadas para comparação, uma vez que são capazes de crescer nestes meios. O dendrograma de similaridade baseado em sete características culturais dos isolados em meio de cultivo GNA revelou grande diversidade, sendo obtidos 50 grupos a 81 % de similaridade. A tolerância a NaCl em meio de cultivo batata/sacarose/ácido málico variou de 0 a 50 g L -1 , permitindo separar os isolados e estirpes tipo em cinco grupos. O diâmetro celular variou de 0,61 a 1,21 µm, e 13 isolados diferiram das estirpes tipo e referência. Os padrões de proteína total, obtidos por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), foram bastante diversos, possibilitando a formação de 15 grupos com similaridade a 75 %. Não houve relação entre os grupos formados pelas várias características estudadas, tampouco destes com as áreas de origem dos isolados. Os meios de cultivo Fam e JNFb detectaram, além das espécies-alvo, outras não identificadas. A alta dissimilaridade da maioria dos

Tolerância de bactérias diazotróficas simbióticas à salinidade in vitro

“…O sobrenadante foi descartado e as célu-las foram ressuspensas em 1 mL de solução salina estéril (NaCl 5,5 g L -1 ) e centrifugadas novamente, repetindo o processo de lavagem das células por três vezes. Com esse processo, também realizado por Trannin et al (2001), Matsuda et al (2002a) e Nóbrega et al (2004), objetivou-se a remoção de resíduos do meio de cultura do inóculo que poderiam resultar num falso crescimento positivo. Em seguida, alíquotas de 0,1 mL de suspensões de células lavadas de bactérias em solução salina foram inoculadas e espalhadas com alça de Drigalsky em placas que continham meio 79 modificado por adição de soluções NaCl, que proporcionaram uma concentração final no meio de cultura de 1; 2; 2,5; 3; 10; 20; 30 e 50 g L -1 .…”

“…A literatura é bem diversificada quanto a informações sobre as diferentes capacidades de bactérias diazotróficas, tanto associativas quanto simbióticas, em tolerar salinidade (CHEN et al, 1995;SHEREEN et al, 1998;RASA et al, 2001;TAMIMI, 2001;HUNGRIA et al, 2001;NÓBREGA et al, 2004), e as faixas de tolerância das espécies diazotróficas simbióticas observadas variaram de 0 a 60 g L -1 de NaCl. Estudos com essa finalidade objetivam não só identificar estirpes potenciais para usos diversos, mas também auxiliar na caracterização das espécies bacterianas (CHEN et al, 2000;FRIONI et al, 2001;NÓBREGA, et al, 2004).…”

“…Estudos com essa finalidade objetivam não só identificar estirpes potenciais para usos diversos, mas também auxiliar na caracterização das espécies bacterianas (CHEN et al, 2000;FRIONI et al, 2001;NÓBREGA, et al, 2004).…”

Associative diazotrophic bacteria in grass roots and soils from heavy metal contaminated sites

“…(A. lipoferum, A. brasilense, A. amazonense) Döbereiner 1984, Döbe-reiner et al 1995) and Herbaspirillum spp. (H. seropedicae, H. rubrisubalbicans) (Döbereiner et al 1995) as well as other diazotrophs (Nóbrega et al 2004) such as Burkholderia spp. The following media were used: Fam (Magalhães and Döbereiner 1984), NFb and JNFb (Döbereiner et al 1995).…”

“…Cultures were obtained as described previously for associative diazotrophs (Nóbrega et al 2004). Wholecell protein extracts were prepared and sodium dodecylf sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) performed by small modifications of the procedure of Laemmli (1970) as described by Kiredjian et al (1986).…”