RESUMOEste trabalho teve como objetivo caracterizar o perfil peptídico de hidrolisados protéicos de farinha de trigo, após a remoção de fenilalanina. Inicialmente, as proteínas foram extraídas e hidrolisadas enzimaticamente, empregando-se a associação sucessiva de uma pancreatina comercial e de um extrato enzimático bruto obtido da casca de abacaxi (EB), preparado no laboratório. Em seguida, os hidrolisados protéicos foram tratados pelo carvão ativado para a remoção de fenilalanina e, então, fracionados por cromatografia líquida de alta eficiência de exclusão molecular, seguida pela quantificação dos peptídeos e aminoácidos livres pelo método da Área Corrigida da Fração. O efeito de alguns parâmetros hidrolíticos, tais como a ordem de adição das enzimas, a temperatura de reação, a relação enzima: substrato (E:S), foi avaliado, assim como o efeito do tratamento físico da amostra, visando, também, à redução de custos para a adaptação desse processo em larga escala. Foi observado que o emprego do ultraturrax no preparo da amostra foi benéfico, tendo produzido um menor teor de grandes peptídeos. Além disso, o conjunto dos resultados obtidos demonstrou a vantagem de se utilizar a pancreatina (E:S = 4:100) primeiramente, por 3h30min, seguida da ação do EB (E:S = 10:100) durante 1h30min, nas condições ótimas de pH e temperatura de cada enzima, produzindo uma maior quantidade de di-tripeptídeos (23,58%), um dos maiores teores de aminoácidos livres (36%) e o menor conteúdo de grandes peptídeos (12%).Palavras-chave: Farinha de trigo. Hidrolisados protéicos. Remoção de fenilalanina. Perfil peptídico.