Catalytic antibodies in clinical and experimental pathology: human and mouse models

Autoantibodies to myelin basic protein catalyze site-specific degradation of their antigen

“…One hundred nanograms of the assayed antibody was separated on the 5-20% gradient SDS͞PAGE containing 30 g͞ml of the fluorescent substrate BSA-FITC, synthesized as described in ref. 15 in the separating gel. After being washed in 2.5% Triton X-100, the gels were incubated for 72 h in 50 mM Tris⅐HCl (pH 7.6)͞10 mM CaCl 2 ͞0.1% NaN 3 solution at 37°C in the dark and visualized by ChemiImager apparatus (Alpha Innotech) by using midrange UV transillumination and a 540-nm light filter.…”

“…We noted augmented levels of the proteolytic activity in IgG fractions of the sera of MBP seropositive MS patients compared to IgGs of healthy donors (15), and, therefore, we hypothesized that autoantibodies toward MBP possessed the antigen-specific proteolytic activity. To test this hypothesis, we analyzed the proteolytic activity of the autoantibodies isolated from 24 clinically definite MS patients.…”

Proteolytic activity of IgG-antibodies of mice, immunized by calf thymus histones

“…Вста-новлено, що руйнування певних автоантигенів протабзимами тісно позв'язане з розвитком певних автоімунних захворювань. Наприклад, у хворих на гострий алергічний тиреоїдит антитиреоглобулінові автоантитіла здатні гідролізувати тиреоглобулін [7], у хворих на алергічний міокардит виявлено автоантитіла, які гідролізують міозин [8], а у хворих на розсіяний склероз присутні автоантитіла, здатні гідро лізувати основний протеїн мієліну (ОПМ) [8,9]. Вузька субстратна специфічність робить прот абзими перспективними молекулярними мар-керами у прогнозуванні розвитку автоімунних захворювань.…”

“…У мишей інших ліній розвиток автоімунних процесів можна спричи-нити введенням певних чинників, наприклад, пристану [23,24]. Для вивчення протеолітично активних антитіл використовують лінії мишей: NZB/W, MRLlpr/lpr, SJL/J [8,[22][23][24]. У мишей лінії BALB/c не спостерігається спонтанний розвиток жодних автоімунних процесів, і вони нечутливі до дії пристану.…”

“…Препарати антитіл діалізували проти буфера ТБС (20 мМ трисHCl, pH 7,5; 0,15 M NaCl) протягом 18 год і очищали афінною хроматографією на колонці, наповненій протеїн Gсефарозою (Sigma Aldrich, США). IgG елюювали з колонки 0,1 М буфером гліцинНСl (рН 2,6) і нейтралізували 1,5 М буфером трисHCl (pH 8,8), після чого антитіла діалізували проти розчину ТБС про-тягом 18 год. Концентрацію протеїну в зразках еКСПеРиМеНТАЛьНІ РОБОТи вимірювали на спектрофотометрі NanoDrop ND1000 (NanoDrop, США).…”