Strauss, C. E., McAllister, T. A. and Selinger, L. B. 2004. Development of Pichia pastoris as a rumen escape vehicle for the intestinal delivery of recombinant proteins in ruminants. Can. J. Anim. Sci. 84: 611-619. The effectiveness of cellular encapsulation as a method for delivery of bioactive proteins and limiting amino acids to the small intestine of ruminants was investigated. Intracellular expression of green fluorescent protein variant (GFPuv) in Pichia pastoris was used as a visible marker to assess the cellular integrity of P. pastoris and determine the potential of this approach for protecting recombinant proteins from microbial proteolysis in the rumen. Fluorescent cells were easily identified in the presence of strained ruminal fluid when viewed by epifluorescent microscopy, and intact cells were readily enumerated. Batch cultures with rumen digesta demonstrated that 93, 97 and 25% of P. pastoris cells remained intact after 36 to 48 h of incubation in clarified ruminal fluid, an isolated bacterial fraction, and whole ruminal fluid, respectively. In continuous culture (Rusitec) with a dilution rate of 0.75 d -1 , 19% of P. pastoris cells flowed intact from the fermentation vessels. In vitro abomasal simulations demonstrated that 84% of inoculated P. pastoris had lysed within 12 h of incubation, a property that is necessary for the release of encapsulated protein prior to the small intestine. These in vitro studies suggest that P. pastoris may be an effective vehicle for post-ruminal delivery of bioactive proteins in ruminants. Les auteurs ont effectué des recherches pour voir si l'encapsulation cellulaire est une méthode efficace pour acheminer les protéines bioactives et les acides aminés limitants jusqu'à l'intestin grêle des ruminants. Ils se sont servis de l'expression intracellulaire du variant à protéine verte fluorescente de Pichia pastoris comme marqueur pour évaluer l'intégrité cellulaire de P. pastoris et voir si cette approche met les protéines recombinantes à l'abri de la protéolyse par les bactéries du rumen. Les cellules fluorescentes sont faciles à identifier par microscopie à fluorescence dans le liquide du rumen filtré et on compte aisément les cellules intactes. La culture par lot des digest du rumen indique que 93 %, 97 % et 25 % des cellules de P. pastoris restent intactes après 36 à 48 heures d'incubation dans le liquide du rumen clarifié, dans une fraction de la microflore et dans le liquide du rumen entier, respectivement. Dans les cultures continues (Rusitec) à un taux de dilution de 0,75 par jour, 19 % des cellules de P. pastoris sortent intactes des cuves de fermentation. La simulation in vitro du passage dans l'abomasum indique que 84 % des cellules de P. pastoris inoculées sont détruites dans les 12 heures d'incubation qui suivent, propriété essentielle à la libération de la protéine encapsulée avant son arrivée dans l'intestin grêle. Ces études in vitro laissent croire que P. pastoris pourrait être un véhicule intéressant pour soustraire les protéines bio-actives à la dégr...