Characterization of Mesenchymal Stem Cells Isolated From Feline and Canine Adipose Tissue

Abstract

Мультипотентные мезенхимные стволовые клетки (ММСК) рассматриваются как перспективный инструмент регенеративной медицины для лечения различных заболеваний мелких домашних животных. ММСК обладают высокой пролиферативной активностью, мультипотентными свойствами, низкой иммуногенностью, а также способностью мигрировать к поврежденной ткани и содействовать ее заживлению и регенерации. В настоящее время активно развиваются методы регенеративной медицины для решения проблем, с которыми трудно справиться альтернативными способами лечения. Однако данные о применении ММСК в клинической практике опережают работы по изучению свойств этих клеток в культуре. В связи с этим нами из внутренней жировой ткани (ЖТ) кошек и собак выделены клетки с фенотипом, подобным ММСК млекопитающих. Цель исследования, представленного в этом сообщении, заключалась в изучении культуральных свойств впервые выделенных клеток in vitro. Клетки выделяли посредством последовательной механической и ферментативной обработки жиров. Для ферментативной диссоциации ткани использовали 0,01 % раствор коллагеназы II типа на основе среды DMEM-LG («ПанЭко», Россия) с низким содержанием глюкозы (1 г/л) при 37 С в течение 60 мин. Сравнительный анализ свойств полученных клеточных популяций выявил, что клетки, выделенные из ЖТ кошек и собак, имели схожие морфологические характеристики и представляли собой два типа клеток: мелкие округлые клетки и более крупные узкие веретенообразные с фибробластоподобной морфологией. Обе популяции проявляли способность к сильной адгезии к культуральному пластику и высокую клонообразующую способность (88,3±0,10 % у ММСК кошек и 88±0,15 % у ММСК собак). Время одной цитогенерации у ММСК кошек составило 34,6±0,02 ч, у собак 50,0±0,01 ч. Митотический индекс ММСК ЖТ кошки и ММСК ЖТ собаки-соответственно 3,4 и 2,7 ‰. Способность ММСК кошки и собаки к индукционной остео-, хондро-и адипогенной дифференцировке in vitro изучали с использованием наборов StemPro® Osteogenesis Differentiation Kit, StemPro® Chondrogenesis Differentiation Kit и StemPro® Adipogenesis Differentiation Kit («Gibco», США). Адипогенная дифференцировка сопровождалась появлением клеток округлой формы с липидными везикулами в цитоплазме, которые выявлялись при окрашивании жировым красным O. Окрашивание ММСК ЖТ кошки и собаки на специфическую активность эндогенной щелочной фосфатазы оказалось положительным на 14-е сут культивирования в индукционной среде. Окрашивание ММСК ЖТ серебрением по von Kossa выявило в клетках секрецию внеклеточного матрикса в виде фосфатов и карбонатов на 21-е сут после индукции. После культивирования клеток, выделенных из ЖТ кошек и собак, в хондрогенной среде в течение 21 сут было обнаружено формирование круглых структур, которые окрашивались альциановым синим, с визуализируемыми изогенными группами, схожими с лакунами гиалинового хряща. Таким образом, было показано, что клетки, выделенные из ЖТ кошек и собак, проявляют в культуре свойства ММСК. Полученные культуры клеток были размножены и депонированы в Специализированную Коллекцию перевиваемых со...

Extracellular Vesicles Including Exosomes From Animal Mesenchymal Stem/Stromal Cells

“…Коваленко РАН в 2023 году. Использовали МСК, полученные нами ранее (16)(17)(18)(19) из костного мозга (КМ) крупного рогатого скота (КРС) и овец, пуповинной крови (ПК) лошадей, жировой ткани (ЖТ) овец, КРС, лошадей, собак и кошек, которые были охарактеризованы, стандартизированы и депонированы в Специализированную коллекцию перевиваемых соматических культур сельскохозяйственных и промысловых животных РККК (П) (СХЖ РАН) при ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН. МСК размораживали и засевали в матрасы с площадью роста 25 см 2 , через 48 ч пересевали в матрасы с площадью роста 175 см 2 в соотношении 1:7 и инкубировали в течение 10 сут.…”