Cloning and expression of an anti-LDL(-) single-chain variable fragment, and its inhibitory effect on experimental atherosclerosis

Kazuma, Soraya Megumi; Cavalcante, Marcela Frota; Telles, Andréia Elisa Rodrigues; Maranhão, Andréa Queiroz; Abdalla, Dulcinéia Saes Parra

doi:10.4161/mabs.25859

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“…The eluted sample, containing 80% of the initial scFv content with a purity superior to 90% according to electrophoreses analysis (data not shown), was extensively dialyzed against phosphate buffered saline (PBS) solution pH 7.2 before been used. Besides, the specificity and affinity of the purified antibody fragment against LDL(‐) was confirmed by ELISA …”

Section: Methodsmentioning

confidence: 90%

Assessment of the effect of triton X‐114 on the physicochemical properties of an antibody fragment

Malpiedi

Nerli

Abdalla

et al. 2014

Biotechnology Progress

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The effect of Triton X-114 on the physicochemical properties of a single-chain antibody fragment (scFv) has been studied. According to the far UV circular dichroism spectroscopy, the secondary structure of the recombinant antibody was not significantly affected by the presence of Triton. From the antibody tertiary structure analysis, it was found that the surfactant could be located around the tryptophan molecules accessible to the solvent, diminishing the polarity of its environment but maintaining most of the protein structure integrity. However, in certain conditions of high temperature and high concentration of denaturant molecules, the presence of TX could compromise the antibody fragment stability. These results represent a previous step in designing scFv purification protocols and should be considered prior to developing scFv liquid-liquid extraction procedures.

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Section: Methodsmentioning

confidence: 90%

Assessment of the effect of triton X‐114 on the physicochemical properties of an antibody fragment

Malpiedi

Nerli

Abdalla

et al. 2014

Biotechnology Progress

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“…Ocorre um rápido influxo da LDL (-) para o interior dos macrófagos por SR o que, por falta de regulação por feedback negativo, resulta na formação das células espumosas, bem como o acúmulo dessas no espaço subendotelial, promovendo o desenvolvimento de lesões designadas como estrias gordurosas, a primeira etapa da aterogênese (KAZUMA et al, 2013).…”

Section: 3unclassified

“…Com tempos superiores a 60 minutos, os macrófagos tratados com p1A3-Cy5 apresentam MIF superior aos tratados com p2C7-Cy5, mostrando assim que apesar das células interagirem com os peptídeos, uma maior quantidade de p1A3 foi captada no mesmo tempo comparado com o p2C7. Para a LDL (-) observa-se uma internalização mais lenta com cerca de 90% de células marcadas aos 180 minutos (Figura 31 B), conforme descrito anteriormente (KAZUMA, 2013). Adicionalmente, ao final de 4 horas, a MIF para a LDL (-) foi inferior à dos peptídeos (Figura 34 A).…”

Section: Captação Dos Peptídeos Por Macrófagos Murinosunclassified

Estudo da interação de peptídeos mimotopos da LDL eletronegativa com células endoteliais e macrófagos

Tripodi¹

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AGRADECIMENTOSAgradeço a todos que transitaram por este período da minha vida, e que vida foi essa, por tempo determinado ou não. Pois teve gente que veio só pra me testar mesmo, teve gente que veio, foi e veio de novo. Mas agradeço mesmo assim.Agradeço aos meninos (e menina) da república, que mais parece um bando de filósofos discutindo de madrugada o futuro do mundo, mas também roubando meu nescau. Mas é por esses momentos lúdicos que eu agradeço. Obrigado Felipe, Cassio, Mari e Erick (primeira geração) e Rafael e Guilherme (segunda geração). Uma família tradicional brasileira (sqn).Obrigado aos meus pais que até hoje não entenderam o que eu estou fazendo e o motivo de eu não tentar a iniciativa privada, mas todo pós-graduando deve enfrentar esse problema. Obrigado Sueli e Mauricio. Agradeço a minha vó Neide por aturar as brincadeiras, pois mesmo ela tendo mais de 80 anos ainda jogo almofada nela.Existem amigos que não estão sempre presentes fisicamente, mas o sentimento não muda, obrigado Stefani e agora é sua vez de entrar no mestrado ok? Obrigado ao alemão mais brasileiro de todos, Julius. E Evelin, "tamo junto" como os mais ferrados, sempre.Aos meus amigos de laboratório e amigos de laboratório vizinho, pois a bioquímica não é grande o suficiente para tanto amor junto. Obrigado pelas broncas Marcela! Eu sei que sou bagunceiro, mas juro que tento me organizar. Soraya e Jaqueline companheiras inseparáveis do bandejão. E poderei terminar o doutorado (espero que em breve) e serei sempre o mestrando para o Walter. Obrigado por me aturar (e alimentar) Silene, Maysa, Maryana e Marcela. Felipe, provavelmente será o primeiro brasileiro ganhador do prêmio Nobel, sim, já desisti da nossa aposta, dá muito trabalho.Mesmo estando longe, 9304 km aproximadamente, seria leviano da minha parte se não agradecesse a Martina, sem ela eu não estaria aqui (literalmente não estaria).Obrigado mesmo pela oportunidade Dulcineia, pois sem ela não seria quem eu sou hoje, e olha, eu gosto bastante de quem me tornei, agradeço imensamente por esses anos da minha vida no seu grupo de pesquisa, pelos puxões de orelha e paciência comigo e meus textos hemorrágicos.Agradeço a FAPESP e ao CNPq pelo apoio financeiro para a execução deste projeto e pelo auxílio mensal por meio de bolsas.Um acontecimento é nada mais do que um ponto de quatro coordenadas no plano espaço-tempo. Espero que existam muitos pontos na vida de cada um de vocês e que eu tenha sido um deles. Introdução: Dentre as diversas formas modificadas da lipoproteína de baixa densidade (LDL), a LDL eletronegativa, LDL (-), contribui para o processo aterosclerótico, promovendo o recrutamento leucocitário para a intima arterial e modulando a resposta inflamatória. Mimotopos são moléculas que podem se ligar à porção variável de um anticorpo, a enzimas ou a receptores. Os peptídeos mimotopos da LDL (-) são moléculas capazes de mimetizar a conformação de epítopos expostos apenas quando a LDL sofre modificações in vivo. Objetivo: Avaliar os efeitos de peptídeos mimotopos da LDL(-), previam...

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“…Uma vez que as proteínas produzidas a partir de células animais, quando injetadas em humanos, podem gerar uma resposta imune indesejada (HAMA -Human Anti-Murine Antibodies). Esta resposta provoca a remoção dos mAbs da circulação e formação de imunocomplexos, em alguns casos pode evoluir para eventos adversos fatais (Hwang e Foote, 2005 ) e em pequena escala (agitador orbital) (Kazuma et al, 2013). Este fato limita o desenvolvimento de testes pré-clínicos e clínicos.…”

Section: Scfv Anti-ldl(-)unclassified

“…Baseia-se na contagem do número de células que captaram o fluoróforo iodeto de propídio (PI), esse marcador fluorescente é capaz de ligar-se ao DNA de células que estão com as membranas celulares comprometidas, que é um indicativo de morte celular (Deere et al, 1998;Hohenblum, Borth e Mattanovich, 2003;Hyka et al, 2010). Nestes ensaios obteve-se rendimento de 10,3 ± 1 mg.L -1 de scFv purificado, este valor de scFv produzido está bem próximo a 9,5 mg.L -1 obtido por (Kazuma et al, 2013) e foi utilizado como referência da produção em frascos agitados.…”

Section: Viabilidade Celularunclassified

Produção de fragmento recombinante de anticorpo em Pichia pastoris

Feitosa¹

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Cloning and expression of an anti-LDL(-) single-chain variable fragment, and its inhibitory effect on experimental atherosclerosis

Abstract: (2013) Cloning and expression of an anti-LDL(-) single-chain variable fragment, and its inhibitory effect on experimental atherosclerosis, mAbs, 5:5, 763-775,

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Assessment of the effect of triton X‐114 on the physicochemical properties of an antibody fragment

Assessment of the effect of triton X‐114 on the physicochemical properties of an antibody fragment

Estudo da interação de peptídeos mimotopos da LDL eletronegativa com células endoteliais e macrófagos

Produção de fragmento recombinante de anticorpo em Pichia pastoris

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