Cloning, Expression and Stljdy of Immijnological Properties of the Streptococci Group B C5a Peptidase Recombinant Protein

Abstract

ВведениеStreptococcus agalactiae или стрептококк груп-пы В (СГВ) как вид был идентифицирован в кон-це XIX века в качестве возбудителя коровьего ма-стита. Однако внимание ученых он привлек лишь в конце 30-х годов XX века, когда было показано, что этот микроорганизм вызывает ряд болезней у человека [14,15]. В настоящее время известно, что СГВ является естественным обитателем пря-мой кишки человека и входит в состав условно патогенной вагинальной флоры женщин. На-ряду с этим СГВ может вызывать различную па-тологию беременности, в том числе выкидыши, внутриутробное поражение плода, преждевремен-ные роды. СГВ приводит к развитию серьезных инфекций у новорожденных, таких как сепсис, пневмония и менингит. Особую опасность стреп-тококковая инфекция представляет в форме мол-ниеносного сепсиса у детей не старше 10 дней, приводя к высокой смертности младенцев [15]. Адрес для переписки:Дуплик Надежда Владленовна 197376, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12. Тел.: (812) 234-05-42. Факс: (812) 234-94-77. E-mail: nadezhdaduplik@gmail.com Государственное учреждение «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН», Санкт-ПетербургРезюме. Полученный с помощью полимеразной цепной реакции фрагмент гена, кодирующий N-терминальную аминокислотную последовательность С5а пептидазы стрептококка группы В (СГВ), был проклонирован в гетерологичной системе E. coli. Рекомбинантный полипептид SCPB1 был экспрес-сирован в E. coli и аффинно очищен с помощью Ni-сефарозы. Молекулярная масса SCPB1 оказалась равной 43,0±0,5 kDa. Иммуногенные свойства SCPB1 изучали в опытах по иммунизации лабораторных животных. Максимальный титр специфических антител класса G к SCPB1 в иммунных сыворотках (1:5,1 x 10 4 и 1:1,6 x 10 6 для мышей и кроликов соответственно) позволяет утверждать, что SCPB1 обладает иммуногенностью. Кроме того, в сыворотках от женщин, перенесших СГВ-инфекцию, также обнаружи-вались антитела к SCPB1, что свидетельствует о гуморальном иммунном ответе человеческого организма на исследуемую часть С5а пептидазы. Протективные свойства антител к SCPB1 были продемонстриро-ваны in vitro (опсонофагоцитарный тест) и in vivo (модель генерализованной инфекции у мышей).Ключевые слова: стрептококк группы В, С5а пептидаза, рекомбинантный полипептид SCPB1, иммуногенность, антитела. Duplik N.V., Koroleva I.V., Suvorov A.N. Cloning, ExprEssion and study of immunologiCal propErtiEs of thE strEptoCoCCi group B C5a pEptidasE rEComBinant protEin abstract. Molecular mass of SCPB1 was estimated to be equal to 43.0±0.5 kDa. Immunization experiments were performed in laboratory animals to investigate the SCPB1 immunogenic properties. Maximum titers of IgG antibodies against SCPB1 (1:5,1 х 10 4 и 1:1,6× x 10 6 for mice and rabbits, respectively) indicated to SCPB1 immunogenicity. Moreover, the antibodies against SCPB1 were revealed in sera from women infected with GBS thus designating the humoral immune response of human organism to C5a peptidase fragment under study. Protective properties of anti-SCPB1 antibodies against were demon...