Lactobacillus plantarum 8P-A3 is a strain which is well known on the Russian pharmaceutical market and it is included in several probiotic products. The strain has been widely used since 1973 but the mechanisms of its antibacterial activity were unknown. L. plantarum 8P-A3 expressed high antagonistic activity against the wide range of bacterial pathogens including Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae strains. DNA sequence analysis of L. plantarum 8P-A3 genome revealed the presence of a complete plantaricin locus of about 20,000 bp encoding genes of at least two bacteriocins--plantaricins EF and NC8. The plantaricin locus found in L. plantarum 8P-A3 is homologous to the plantaricin cluster in L. plantarum J51.

In a rabbit model, we have previously reported evidence for a pathogenic role of streptococcal IgG Fc-binding proteins (IgGFcBP) in poststreptococcal glomerulonephritis (PSGN). These proteins, of the M protein family, were shown to trigger anti-IgG production and enhance renal deposition of IgG and/or immune complexes (ICs), with resulting activation of complement and cytokine cascades. In the present study, type M12/emm12, group A streptococci (GAS) were found often to bind artificial ICs, viz. peroxidase-anti-peroxidase rabbit IgG (PAP) or tetanus toxoidanti-tetanus human IgG (TAT), rather than monomeric IgG. Animals injected with each of four IC binding clinical isolates (from patients with scarlet fever or PSGN) showed pronounced inflammatory and degenerative glomerular changes, morphologically similar to human PSGN, with membrane thickening and IgG and complement C3 deposition, as well as secretion of IL-6 and TNF-a by mesangial and endothelial cells. In contrast, non-binding strains (two from asymptomatic carriers and one from a PSGN case) failed to trigger any renal changes. Only the IC binding strains induced elevated titres of anti-IgG. Though the streptococcal binding component(s) has not been demonstrated, the selective binding of ICs by type M12/emm12 strains appears important for the well-known, marked nephritogenic potential of this GAS type.

There was investigated a new recombinant strain of Streptococcus pyogenes serotype M39, which did not express M-protein - “Gurov” emm-. It revealed a higher antitumor activity towards transplantable solid murine tumors compared to wild type “Gurov”. In a model of sygeneic transplantable hepatoma 22a we observed retardation of tumor growth and increase of survival after twice intratumoral injections of live S. pyogenes “Gurov” emm- as compared to a group of mice that received injections of S. pyogenes “Gurov” as well as to a control group of mice without treatment. In a model of transplantable Sarcoma 37 we also observed retardation of tumor growth after the introduction of mutant strain but without positive effect on survival. Additionally, it was showed that “Gurov” emm- strain possessed a higher direct cytotoxic effect towards hepatoma 22а cell line in vitro as compared to wild type “Gurov”. Genetic modification of S. pyogenes “Gurov” strain attenuated its virulence and allowed to consider this strain as potent candidate for further studies and its possible application for oncolytic therapy in the future.

ВведениеStreptococcus agalactiae или стрептококк груп-пы В (СГВ) как вид был идентифицирован в кон-це XIX века в качестве возбудителя коровьего ма-стита. Однако внимание ученых он привлек лишь в конце 30-х годов XX века, когда было показано, что этот микроорганизм вызывает ряд болезней у человека [14,15]. В настоящее время известно, что СГВ является естественным обитателем пря-мой кишки человека и входит в состав условно патогенной вагинальной флоры женщин. На-ряду с этим СГВ может вызывать различную па-тологию беременности, в том числе выкидыши, внутриутробное поражение плода, преждевремен-ные роды. СГВ приводит к развитию серьезных инфекций у новорожденных, таких как сепсис, пневмония и менингит. Особую опасность стреп-тококковая инфекция представляет в форме мол-ниеносного сепсиса у детей не старше 10 дней, приводя к высокой смертности младенцев [15]. Адрес для переписки:Дуплик Надежда Владленовна 197376, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12. Тел.: (812) 234-05-42. Факс: (812) 234-94-77. E-mail: nadezhdaduplik@gmail.com Государственное учреждение «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН», Санкт-ПетербургРезюме. Полученный с помощью полимеразной цепной реакции фрагмент гена, кодирующий N-терминальную аминокислотную последовательность С5а пептидазы стрептококка группы В (СГВ), был проклонирован в гетерологичной системе E. coli. Рекомбинантный полипептид SCPB1 был экспрес-сирован в E. coli и аффинно очищен с помощью Ni-сефарозы. Молекулярная масса SCPB1 оказалась равной 43,0±0,5 kDa. Иммуногенные свойства SCPB1 изучали в опытах по иммунизации лабораторных животных. Максимальный титр специфических антител класса G к SCPB1 в иммунных сыворотках (1:5,1 x 10 4 и 1:1,6 x 10 6 для мышей и кроликов соответственно) позволяет утверждать, что SCPB1 обладает иммуногенностью. Кроме того, в сыворотках от женщин, перенесших СГВ-инфекцию, также обнаружи-вались антитела к SCPB1, что свидетельствует о гуморальном иммунном ответе человеческого организма на исследуемую часть С5а пептидазы. Протективные свойства антител к SCPB1 были продемонстриро-ваны in vitro (опсонофагоцитарный тест) и in vivo (модель генерализованной инфекции у мышей).Ключевые слова: стрептококк группы В, С5а пептидаза, рекомбинантный полипептид SCPB1, иммуногенность, антитела. Duplik N.V., Koroleva I.V., Suvorov A.N. Cloning, ExprEssion and study of immunologiCal propErtiEs of thE strEptoCoCCi group B C5a pEptidasE rEComBinant protEin abstract. Molecular mass of SCPB1 was estimated to be equal to 43.0±0.5 kDa. Immunization experiments were performed in laboratory animals to investigate the SCPB1 immunogenic properties. Maximum titers of IgG antibodies against SCPB1 (1:5,1 х 10 4 и 1:1,6× x 10 6 for mice and rabbits, respectively) indicated to SCPB1 immunogenicity. Moreover, the antibodies against SCPB1 were revealed in sera from women infected with GBS thus designating the humoral immune response of human organism to C5a peptidase fragment under study. Protective properties of anti-SCPB1 antibodies against were demon...