Competencia del ovocito bovino obtenido por ovum pick-up valorado mediante el azul brillante de cresilo

Abstract

RESUMENEl objetivo del presente estudio fue valorar la prueba del azul brillante de cresilo (BCB) como método indirecto para seleccionar ovocitos competentes para la producción in vitro de embriones (PIV). Los complejos cúmulos-ovocitos (COC) fueron obtenidos de dos vaquillas criollas sometidas a dos tratamientos: T1 = COC recuperados por OPU (ovum pick-up) previa estimulación con FSH-LH; T2 = COC recuperados sin previa estimulación de la donante (testigo). Las dos vaquillas fueron alternadas en los dos tratamientos y se hicieron cinco repeticiones. Los COC recuperados fueron clasificados en tipos A, B, C y D. Luego se aplicó la prueba del BCB a cada uno de los tipos de COC para determinar si son BCB+ o BCB-. T1 permitió recuperar 5.2 más COC que T2 (p<0.05). Al aplicar la prueba del BCB se determinó que todos los ovocitos tipo A de T1 y T2 fueron BCB+; es decir, terminaron su crecimiento y se encontraban listos para iniciar el proceso de maduración in vitro; sin embargo, alrededor del 50% de los COC tipo B, C y D de T1 y T2 fueron BCB+. Se concluye que la selección de COC basado en las características morfológica es un método confiable únicamente para los de tipo A, y tiene un 50% de error para los COC de tipo B, C y D y, por lo tanto, la aplicación de la prueba del BCB permite mejorar esta selección de forma no invasiva.

Capacidad de reinicio de la meiosis de ovocitos provenientes de folículos de varios tamaños obtenidos de ovarios de camal

“…Varios investigadores describen que los ovocitos adquieren competencia meiótica cuando alcanzan diámetros superiores a 110 µm, lo cual corresponde a folículos de 2-3 mm de diámetro (Ayala et al, 2018). Este concepto sugiere que los ovocitos de menor tamaño no han terminado la síntesis de ARN y, por consiguiente, se encuentran en fase de crecimiento; es decir, no han completado la maduración nuclear y citoplasmática.…”

“…Una de estas utiliza el Azul Brillante de Cresilo (BCB) para evaluar la actividad de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD), enzima sintetizada en la mitad de la primera fase (S) de crecimiento ovocitario y que disminuye conforme este termina su fase de crecimiento. La tinción BCB ha demostrado ser un método no invasivo y confiable para la selección de ovocitos bovinos (Pujol et al, 2004;Bhojwani et al, 2007), debido a que permite cuantificar la actividad de la G6PDH, tomando como principio a ovocitos que retienen la tinción como aquellos que terminaron su crecimien-to (BCB+) y como ovocitos incoloros a aquellos que se encuentran en crecimiento, por lo que son considerados BCB negativos (Ayala et al, 2018). Sin embargo, Karami et al (2014) determinaron que la prueba del BCB por sí sola no es determinante para seleccionar ovocitos competentes para la producción de embriones in vitro.…”

Supplementation with α-tocopherol during in vitro maturation of bovine oocytes and their subsequent embryo development after fertilization

“…Given the overall higher expansion rates in oocytes of high (grades 1 and 2) and low quality (grades 3 and 4) in all treatment groups of the present study, it is possible to affirm that even some low-quality oocytes can be matured in vitro. In terms of percentages, Ayala et al (2018) indicate that with the use of brilliant cresil blue stain test for selection of viable oocytes according to their competence, up to 78.6% of grade 1 oocytes achieve maturation. Interestingly, in their study 55% oocytes of grade 2 and 61% of oocytes of grade 3 reached maturation.…”

Evaluación del YM976 como alternativo a las hormonas gonadotrópicas en la maduración in vitro de oocitos bovinos y su competencia para el desarrollo embrionario

“…Los oocitos fueron separados y depositados en caja de Petri estéril de 60x15 mm, con 3 ml de medio TCM-199 con sales de Hank (Tissue Culture Medium 199, Gibco/Invitrogen). Los CCOs fueron clasificados morfológicamente bajo visión por estereomicroscopio y solo aquellos con células del cumulus compacto y con más tres capas de células de la granulosa fueron seleccionados para el proceso de maduración in vitro (Lindner y Wrigth, 1983; Hawk y Wall, 1994; Ayala et al, 2018). Finalmente, los CCOs fueron lavados tres veces en medio TCM 199 con sales de Hank y transferidos a caja de Petri de 35 mm con el mismo medio, para ser utilizados en los procedimientos experimentales.…”

“…La evaluación de la expansión del complejo cúmulo-oocito se hizo a las 24 horas de MIV, mediante el uso del estereomicroscopio (Nikon SMZ 450, Nikon Instruments, USA). Se consideró como Grado 1: poco o nada de expansión, Grado 2: la expansión moderada de las capas externas del cúmulo y, Grado 3: expansión de todas las capas (Calder et al, 2003;Ayala et al, 2018). La reanudación de la metafase II se evaluó por la expulsión del primer cuerpo polar.…”