Desarrollo y evaluación de una prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando la secuencia del gen hilA para diagnóstico de fiebre entérica por Salmonella spp.

Abstract

Desarrollo y evaluación de una prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando la secuencia del gen hilA para diagnóstico de fiebre entérica por Salmonella spp. El diagnóstico de fiebre entérica por Salmonella spp. se basa en el aislamiento de la bacteria en hemocultivos el cual consume tiempo, no siempre está disponible y tiene poca utilidad en pacientes con tratamiento antibiótico previo. Por consiguiente, se hace necesario el desarrollo de una prueba rápida, sensible y específica para el diagnóstico de fiebre entérica. Salmonella spp. utiliza el gen hilA (componente de la isla de patogenicidad I) para invadir células epiteliales y producir infección. Al usar la secuencia de este gen se diseñó una prueba de PCR para detectar la bacteria en sangre y se evaluó su sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo, utilizando la metodología prueba de una prueba. La prueba de oro fue el hemocultivo. Se estudiaron 34 individuos con sintomatología de fiebre entérica con aislamiento de Salmonella serotipo Typhi en hemocultivos; 35 individuos con sepsis por otros bacilos Gram negativos aislados de hemocultivo (Klebsiella pneumoniae, 9; Serratia marcescens, 5; Escherichia coli, 4; Pseudomonas aeruginosa, 9; Providencia alcalifaciens, 4, y Enterobacter cloacae, 4) y 150 muestras de sangre de voluntarios asintomáticos. La sensibilidad, especificidad, valor pronóstico positivo y valor pronóstico negativo de la PCR fue del 100%. El número mínimo de UFC/ml que la PCR detecta en sangre es de 10.Palabras clave: PCR, fiebre entérica, gen hilA, Salmonella spp. Development and evaluation of a PCR method for diagnosis of Salmonella enteric fever, based on DNA sequences of the hilA geneTypically, diagnosis of enteric fever due to Salmonella spp. is by bacterial isolation from blood culture; however, the blood culture method is slow, not always available, and not informative in patients with antibiotic treatment. Salmonella spp. uses the hilA gene (component of the pathogenicity island I) to invade epithelial cells and produce infection. Using the hilA gene sequence a PCR test was designed to detect Salmonella in blood samples. The sensitivity (S), specificity (SP), positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) of the PCR method were obtained by testing the blood samples from 34 patients with suspected of enteric fever. Presence of S. typhi was confirmed by blood culture. Blood samples were also tested from 35 patients with infections due to other non-Salmonella pathogens, again corroborated by blood culture (Klebsiella pneumoniae, 9; Serratia marcescens, 5; Escherichia coli, 4; Pseudomonas aeruginosa, 9; Providencia alcalifaciens, 4; Enterobacter cloacae, 4). Control samples were obtained from 150 healthy volunteers. The S, SP, PPV and NPV for the PCR method were all 100%. The lowest number of colony forming units/ml detected by PCR in blood samples was 10.

Desarrollo y validación de una reacción en cadena de la polimerasa múltiple para la identificación de los serogrupos B, C2, D y E de Salmonella enterica

“…El uso de esta PCR-M en alimentos y muestras clínicas debe explorarse para la detección directa del microorganismo, lo cual ya ha sido descrito por otros autores usando metodologías de amplificación de ADN (15,20,26,27).…”

Diagnostic Validity of Flagellin Gene (fliC) in Urine for the Detection of Typhoid Fever

“…antibiotics 4 . There is no evidence to date to suggest that automated systems overcome this shortcoming; indeed, in one study manual and automated blood cultures were equally sensitive for the detection of Salmonella Typhi 5 . The development of molecular methods for diagnosis of infectious diseases has improved the sensitivity, specificity, quality and availability of diagnosis and treatment 4 .…”

“…In typhoid fever it can be an effective tool because it can be used even in cases where antibiotic therapy has been started or the pathogen load is very low. A nested PCR makes the detection more sensitive and is able to detect the presence of even 3 to 5 bacilli 5 . Few studies have been done to diagnose typhoid fever by detecting DNA of Salmonella in blood by nested PCR 6 .…”

Fiebre tifoidea, el arte del diagnóstico por laboratorio

“…No se puede confirmar el diagnóstico de fiebre tifoidea mediante serología, sea cual sea la técnica utilizada. La única forma de confirmarlo es mediante cultivos o mediante reacción en cadena de polimerasa (PCR) 3 .…”