Desempenho das proteínas recombinantes rKLO8, rLb6H, rK28, rK39, 39r2 e 39r4 no diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina: relação com apresentações clínicas da doença e vacinação

Abstract

A leishmaniose visceral (LV), zoonose de transmissão vetorial, é um dos principais problemas de saúde pública no Brasil e outros países tropicais e subtropicais, tendo o cão como importante elemento no ciclo de transmissão. A detecção da infecção nesses animais é parte fundamental no monitoramento da doença. Entretanto, o diagnóstico da LV canina (LVC) é dificultado pela ampla variabilidade clínica e longo período de incubação. No intuito de elevar a acurácia do diagnóstico sorológico da LVC, diversos antígenos recombinantes de Leishmania sp têm sido desenvolvidos e estudados. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho diagnóstico das proteínas recombinantes rKLO8, rLb6H, 39r2 e 39r4 no diagnóstico da LVC, comparados aos antígenos de referência, rK28 e rK39. Primeiramente, os antígenos rK28, rKLO8, rLb6H e rK39 foram avaliados por IgG-ELISA quanto a sua capacidade de detectar e diferenciar cães positivos para TR-DPP® e EIE L.major-like® (grupo CVL), controles negativos de área endêmica (negativos para o teste TR-DPP® - grupo CE), ambos provenientes da cidade de Governador Valadares (MG) e cães que foram imunizados contra LVC (Leish-Tec® - grupo VAC), provenientes da cidade de Belo Horizonte (MG). A reatividade de IgG contra os antígenos rK28, rKLO8, rK39 e rLb6H foi elevada nos soros do grupo LVC, com o maior valor de sensibilidade obtido com rK28 (84%), seguido por rK39 (82%), rKLO8 (75-77%) e rLb6H (52-57%). Os antígenos rK28 e rKLO8 foram mais específicos (95-100% e 93-100%, respectivamente), seguidos de rK39 (86-95%) e rLb6H (95%). Além disso, para todos os antígenos houve reatividade com soro de cães vacinados, embora em números variáveis, sendo maior para rLb6H (25%), seguido por rKLO8 e rK39 (13%) e menor (4,5%) para o antígeno de referência, rK28. Em seguida, os antígenos acima citados, e outras duas novas proteínas recombinantes com 2 ou 4 cópias da repetição de 39 aminoácidos (39r2 e 39r4), foram estudadas utilizando amostras de soro de cães negativos para o teste RIFI (grupo SAE) e cães com infecção por Leishmania confirmada parasitologicamente, assintomáticos (AD), oligossintomáticos (OD) e sintomáticos (SD), provenientes de Belo Horizonte (MG). A reatividade de anticorpos IgG e IgG2 foi maior em todos os grupos clínicos, em comparação ao grupo negativo, para todos os antígenos. Embora IgG1 se apresente elevado (p< 0,05) somente no grupo sintomático para os antígenos rK28, 39r2, 39r4 e rK39, níveis séricos de IgG, IgG1 e IgG2 se correlacionaram com o status clínico para todos os antígenos. Adicionalmente, nossos resultados mostram que rLb6H e rKLO8 se destacaram na detecção de cães assintomáticos (100% e 81,81%, respectivamente), com valores maiores de sensibilidade para rK28 e rLb6H (91,43%), seguidos por rKLO8 (85,71%), 39r2 e 39r4 (ambos, 80%). Em relação ao antígeno rK39, os valores de sensibilidade foram similares nas duas etapas experimentais (82% e 82,86%, respectivamente). Curiosamente, os cães sintomáticos com a maior reatividade de IgG para rK28 tiveram baixa reatividade para rLb6H. Em relação a especificidade, o valor máximo (100%) foi detectado para rK28, 39r2, 39r4 e rK39, provenientes de sequências homólogas entre L. infantum e L. donovani, seguidos por rKLO8 (85,71%) e rLb6H (71,43%). Os resultados mostram características importantes dos antígenos rKLO8, rLb6H, 39r2 e 39r4 para o diagnóstico da LVC, por apresentarem desempenho elevado e comparável aos antígenos de referência rK28 e rK39, permitindo ainda, o aprimoramento da detecção da LVC nos grupos de maior dificuldade diagnóstica (assintomáticos e oligossintomáticos).