Desenvolvimento de material de referência para microbiologia de alimentos contendo estafilococos coagulase positiva em matriz queijo

Abstract

O uso de materiais de referência (MR) é uma das principais ferramentas utilizadas para garantia e controle da qualidade de laboratórios de microbiologia de alimentos. No Brasil, a RDC n.º 12/01 da Anvisa prevê como um dos parâmetros para a avaliação da qualidade de queijos a enumeração de estafilococos coagulase positiva (ECP). O grande desafio na produção de MR destinados a ensaios microbiológicos é a instabilidade natural dos micro-organismos, o que dificulta o desenvolvimento e a manutenção desses MR. O objetivo deste estudo foi produzir um MR quantitativo destinado ao ensaio de enumeração de ECP em matriz queijo. Uma amostra de queijo ultrafiltrado com contagem de ECP <10 UFC/g e número de aeróbios viáveis de 1,22 × 10³ UFC/g foi utilizada como matriz para produção do MR. A matriz foi distribuída em frascos, contaminada com a bactéria alvo em concentração específica e submetida à liofilização. Como crioprotetor, foi utilizada sacarose. O MR produzido foi considerado homogêneo e estável à temperatura < -70 ºC durante todo o período estudado (dez meses). O material apresentou estabilidade a 4, 25, 30 e 35 ºC durante quatro dias; contudo, os resultados indicam que, a 35 ºC, ocorre um decréscimo na concentração celular. A -20 ºC, o MR apresentou-se estável durante 48 dias. Conclui-se que o material apresentou todos os requisitos necessários de um MR de qualidade e poderia ser transportado aos laboratórios participantes de um ensaio de proficiência a temperaturas de até 35 ºC por até quatro dias, uma vez que os resultados indicaram a manutenção da concentração celular neste período. Esse foi o primeiro trabalho a descrever uma metodologia de produção de MR contendo ECP em matriz queijo.

Preparation of Reference Material for Proficiency Test for Enumeration of Coliforms in Cheese Matrix

“…Literature data show that RM produced in lyophilized skim milk matrix are stable for periods up to 237 days stored at ≤−70˚C [9,10]. In cheese matrix, Brandao et al [11] obtained a RM containing CPS stable for 10 mouths at ≤−70˚C. Similar results were obtained in this study, where the RM batch produced was stable for 348 days (12 mouths).…”

“…A homogeneous RM produced in this same ultra-filtered cheese matrix containing coagulasepositive staphylococcus (CPS) was also been described [11]. The publication of others studies about production of RM in other types of food matrix is rare due to the difficulties in obtaining homogeneous and stable materials and because the some producers do not have interest in disclosing their production techniques.…”

“…Although it is known that PT samples should resemble as closely as possible to routine samples analyzed by participant laboratories, it is a common practice to produce lyophilized samples in order to improve analyte stability [9][10][11]20]. All vials presented vacuum and satisfactory appearance after freeze-drying.…”

“…Spray-dried is a common technique used to prepare large batch of contaminated milk powder capsules [6,7]. The freeze-drying by lyophilization has also been used in the production of RM in the field of food microbiology [8][9][10][11]. The main challenge in RM production destined to microbiological assays is the natural instability of micro-organisms, which difficult the development and maintenance of these RM [2].…”

“…To circumvent these problems, some authors emphasize the importance of the use of cryo-protector, such as carbohydrates, during the processes of freezing and desiccation, with the goal of increasing the viability of bacterial cells [13]. Sucrose has been one of the most commonly carbohydrate used and presented satisfactory results in the production of food RM containing micro-organisms [11].…”