Desenvolvimento de um protótipo de controle populacional de capivaras por imunização ativa contra peptídeos ovocitários: clonagem dos gene do gdf9 e bmp15 de capivaras, expressão, purificação das proteínas recombinantes e imunização das fêmeas

Abstract

Devido às aparições cada vez mais frequentes de animais selvagens em regiões rurais e urbanas, gerando um alerta na população, na saúde pública e no ramo econômico, o presente trabalho teve como objetivo a clonagem, sequenciamento, expressão e purificação dos genes do GDF9 e BMP15 de bovinos com o intuito de desenvolver uma medida efetiva de controle populacional das capivaras do DF. Esses fatores atuam na função ovariana de muitos mamíferos, incluso a capivara, e por meio da incorporação dessas proteínas recombinantes bovinas à bactérias da espécie Escherichia coli está em andamento o desenvolvimento de uma vacina capaz de executar uma reação cruzada no sistema imunológico das capivaras. Essa reação desencadeia a produção de antígenos contra a BMP15 e o GDF9 do próprio organismo, proporcionando um bloqueio na maturação dos ovócitos da capivara e assim resultando em uma forma de contracepção ou esterelização imunológica. Para elaboração da vacina, primeiramente foi realizada a superexpressão das proteínas desejadas em bactérias E. coli no laboratório. Em seguida, algumas modificações no genoma das bactérias foram feitas para incluir as sequências proteicas de GDF9 e BMP15 e para torná-las mais resistentes a alguns antibioticos, dessa forma, promovendo a melhor expressão das proteínas. Com a sequência protéica já incorporada ao DNA destas, houve então um processo de transformação das bactérias por intermédio de etapas até a completa produção das proteínas. As primeiras etapas se voltavam para a inoculação de bactérias dentro de um meio e para a indução da produção de proteínas. Depois disso, realizava-se a disjunção das proteínas desejadas das demais estruturas presentes nas bactérias por meio da sonicação, e posterior a ela vinha a centrifugação, na qual se dava continuidade ao processo de separação da proteína na solução do restante das estruturas bacterianas, que ficam em forma de pellet. Em seguida, era efetuada a purificação, etapa que utiliza cromatografia de afinidade e que dá origem à proteína pura. Então, era desempenhado um processo de quantificação, onde a proteína já expressa, purificada e pronta para ser injetada era avaliada na forma de géis que apresentavam a quantidade de proteínas obtidas e confirmavam se elas eram verdadeiramente as proteínas de interesse. Por fim, era avaliada a regulação da concentração do produto final obtido, pois como se faz necessária uma superestimulação no organismo animal, a concentração de proteínas também precisava ser alta. Uma vez que as etapas de produção das proteínas são finalizadas, é adicionado um adjuvante para que a vacina seja aplicada, porém o trabalho não pode avançar até o estágio de imunização das fêmeas por conta da paralisação decorrente da pandemia e de problemas na conclusão do terceiro plano de ação. Pode-se concluir que o manejo de animais silvestres apresenta grandes desafios e com o avanço populacional desordenado faz-se ainda mais necessário buscar soluções para o controle das taxas de fertilidade das capivaras por meio de uma alternativa não invasiva, com um custo benefício vantajoso e de execução viável.