Detection of Cryptosporidium parvum oocysts in calf fecal samples by direct immunofluorescence assay

Abstract

<jats:p>The aim of this study was to produce a conjugate containing anti-Cryptosporidium parvum polyclonal antibodies and standardize a Direct Immunofluorescence Assay (DIF) for detecting C. parvum oocysts in fecal samples from calves. In order to obtain anti-C. parvum polyclonal antibodies, two New Zealand rabbits were immunized with a purified solution of C. parvum oocysts and Freund's adjuvant. Purification of the immunoglobulin G (IgG) fraction was performed by means of precipitation in ammonium sulfate and chromatography using a DEAE-cellulose column. The anti-C. parvum polyclonal antibody titer was determined by means of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The rabbit anti-C. parvum IgG fraction was conjugated with fluorescein isothiocyanate and standardization of the DIF was performed using various dilutions of conjugate on slides positive for C. parvum oocysts. The cross-reactivity of the anti-C. parvum conjugate was tested using oocysts of Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium andersoni, Escherichia coli, Eimeria sp., and Candida sp. An anti-C. parvum conjugate was successfully produced, thus allowing standardization of DIF for detection of Cryptosporidium oocysts in fecal samples. Cross-reactivity of anti-C. parvum polyclonal antibodies with C. andersoni and C. serpentis was also observed.</jats:p>

Cryptosporidium infections in birds - a review

“…The antigens targeted by capture ELISA and DFA present cross-reactivity among the different species of Cryptosporidium, and therefore, does not allow species-specific diagnosis (GRACZYK et al, 1996;JEX et al, 2008;CHALMERS et al, 2011;TEIXEIRA et al, 2011b). Although both methods are commonly applied to detect C. parvum antigens (JEX et al, 2008), they may be useful for the diagnosis of avian cryptosporidiosis (RICHTER et al, 1994;GRACZYK et al, 1996;ROHELA et al, 2005;PAGÈS-MANTÉ et al, 2007).…”

Criptosporidiose bovina: aspectos clínicos, epidemiológicos e terapêuticos

“…Além destes fatores, a sintomatologia clínica da criptosporidiose bovina é dependente da espécie do parasito envolvida na infecção (Muhid et al, 2011). Em bezerros neonatos são geralmente diagnosticadas as maiores taxas de infecção por C. parvum, sendo nesta categoria animal evidenciadas maiores excreções de oocistos por grama de fezes (Feitosa et al, 2008;Meireles et al, 2011;Teixeira et al, 2011), fato oposto em animais adultos (pós-desmame), onde outras espécies do parasito (C. andersoni, C. bovis e C. ryanae) são mais prevalentes (Fayer, 2004). O C. andersoni é um parasito de glândulas gástricas do abomaso de bezerros com idade superior a quatro semanas de vida e animais adultos imunocomprometidos (Fayer et al, 2008).…”

“…As técnicas de microscopia ainda são consideradas as mais utilizadas na rotina laboratorial para o diagnóstico de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais bovinas (Teixeira et al, 2011). As técnicas para detecção microscópica de oocistos de Cryptosporidum spp.…”

Avaliação clínica, sorológica e parasitológica de serpentes naturalmente infectadas com Cryptosporidium serpentis

“…Durante o curso da criptosporidiose em serpentes é comum a intermitência e variação na quantidade de oocistos eliminados em amostras fecais (GRACZYK et al, 1996b; Mesmo que haja reatividade cruzada no ELISA indireto, devido à existência antígenos comuns entre diferentes espécies de Cryptosporidium (GRACZYK et al, 1996a;ALLISON et al, 2011;TEIXEIRA et al, 2011;BORAD et al, 2012), a probabilidade dos anticorpos detectados pelo ELISA indireto serem produzidos contra outra espécie que não seja C. serpentis é pouco provável. Infecção por…”

“…Métodos sorológicos não são comumente utilizados para diagnóstico de criptosporidiose, pois mesmo com utilização de antígenos pouco conservados um resultado positivo indica somente exposição ao gênero Cryptosporidium ou a espécies muito próximas geneticamente, já que há antígenos comuns entre diferentes espécies do parasito (GRACZYK et al, 1996a;ALLISON et al, 2011;TEIXEIRA et al, 2011;BORAD et al, 2012). Além disso, os anticorpos contra Cryptosporidium podem persistir por mais de 12 meses pós-infecção (O´DONOGHUE, 1995).…”