Determination of testosterone in human urine by means of horizontal thin-layer and gas-liquid chromatography

İdrarda Testosteron ve Epitestosteronun İnce Tabaka Kromatografisi ve Gaz Sıvı Kromatografisi İle Tayini

“…(22). Soğu-duktan sonra 3 kez 100 ml eter ile ekstrakte edildikten sonra eterli faz % 20 NaOH ve distile su ile yıkanıp susuz sodyum sülfatdan geçiril-miştir (15,18). Eter fazı kuruluğa kadar uçurulduktan sonra kalıntıya aynen asit hidrolizdeki işlemler uygulanmış ve en son kalıntıya iç standart olarak metiltestosteron ilave edilip gaz kromagotrafisine 5 µl enjekte edilmiştir.…”

“…Diğer taraftan doping amacı ile testosteron suistimalinin belirlenmesi için idrarda testosteron konsantrasyonunun tayini yanında izomeri olan epitestosteron, (17--hidroksiandrost-4-en-3-on) konsantrasyonunun tayini ve T/E oranının hesaplanması da gerekmektedir (2) IOC'nin kurallarına göre T/E'nin 6/1 büyük olması halinde, testosteronun doping amacı ile kullanıldığı kabul edilmektedir (10,11,12). Doping kontrol amacı ile idrarda testosteron ve epitestosteron analizi için, konjugatlarının enzim veya asit hidrolizinden sonra izolasyonları, kantitatif tayinleri ile ilgili kağıt, kolon, ince tabaka kromatografisi (İTK) ile gaz kromatografisi (GK), kütle spektrometresi (MS), radyoimminoassay (RIA) veya bu yöntemlerin kombinasyonları gibi değişik yöntemler kullanılmaktadır (11,13,14,15,16). Bu yöntemlerin, IOC tarafından tescil edilebilmesi için yeterli derecede duyarlı, tekrarlanabilen, spesifik ve kesin olması gerekmektedir (17).…”

“…Testosteron ve epitestosteron ile doğrudan çalışıldığında 0.2 µg madde tanımlanabilmesine karşın asetillemeden sonra 0.05 µg madde düzeyine inilebilmiştir. Elde ettiğimiz duyarlılık sınırı bu konudaki araştırmalarla uyum göstermektedir (15,23). Şekil-1'de testosteron asetat ve epitestosteron asetat standartlarının gaz-sıvı kromatografisindeki kromatogramları gösterilmiştir.…”

“…Bu nedenle her iki steroid de 17. karbon atomundaki hidroksil grubundan asetillenmiştir. Oluşan testosteron asetat ve epitestosteron asetat türevleri laboratuvar koşullarında uzun süre dayanıklıdır ve gaz sıvı kromatografisinin yüksek sıcaklıktaki çalışma koşullarına uygundurlar (14,15). Böylece testosteron asetat ve epitestosteron asetatın SE-30 sabit fazında alıkonma zamanları daha uzun ve farklı olmuştur.…”