Determination of the plasma levels of metyrapone and its enantiomeric metyrapol metabolites by direct plasma injection and multidimensional achiral–chiral chromatography

Abstract

The development and validation of a direct injection high-performance liquid chromatographic (HPLC) method, with column switching, for the determination of metyrapol enantiomers and metyrapone in human plasma is described. The system used in this work was composed of a restricted access media (RAM) bovine serum albumin (BSA) octyl column coupled to an amylose tris(3,5-dimethoxyphenylcarbamate) chiral column. Water was used as eluent for the first 5 min at a flow rate of 1.0 ml/min for the elution of the plasma proteins and then acetonitrile-water (30:70 v/v) for the transfer and analysis of metyrapol enantiomers and metyrapone, which were detected by UV at lambda = 260 nm. The total analysis time was about 32 min. The calibration curves for each enantiomer and for the metyrapone were linear in the ranges 0.075-0.75 microg/ml and 0.150-1.50 microg/ml, respectively. Recoveries, intra- and interday precision and accuracy were determined using three quality controls, one low (0.18 microg/ml), one medium (0.75 microg/ml), and one high (1.35 microg/ml) plasma concentration. Quantitative recoveries and good precision and accuracy were obtained. The limit of quantitation were 0.045 microg/ml for both enantiomers and for the metyrapone.

Desenvolvimento de colunas cromatográficas de meios de acesso restrito proteína-imobilizada e suas avaliações para análise de fármacos com injeção direta de plasma humano

“…Colunas RAM proteína-imobilizada preparadas com BSA 6 , avidina 22 e AGP (α-1-glicoproteína) 23 têm sido utilizadas com sucesso na análise de xenobióticos em leite 18,24 , plasma 20,25,26 , saliva 27 e tecidos biológicos 28,29 . Como a albumina sérica bovina se encontra disponível comercialmente a um custo relativamente baixo e suas propriedades físico-químicas permitem a utilização em várias condições cromatográficas no modo reverso de eluição, o que é uma vantagem quando se trabalha com injeção direta de amostras biológicas, esta proteína foi usada no preparo das colunas RAM avaliadas.…”

“…Em seguida, transferiu-se uma alíquota para uma cubeta de vidro e registrou-se o espectro na região de 190 a 800 nm. As absorbâncias foram medidas no comprimento de onda de 595 nm, relativo à máxima absorção do complexo proteína-corante 20 . O mesmo procedimento foi repetido para as soluções de referência.…”

“…Para avaliar a eficiência de exclusão das proteínas pelas colunas RAM-BSA, alíquotas de 50, 100 e 200 µL de plasma humano foram eluídas, com água a 1,0 mL/min durante 5 min 17,20,25,26 . As proteínas eluídas foram complexadas com o corante azul brilhante e os espectros de absorção foram registrados na região de 190 a 800 nm.…”

Two‐dimensional chromatography method applied to the enantiomeric determination of lansoprazole in human plasma by direct sample injection

“…The upper limit of plasma samples has not yet been determined for the RAM BSA columns. 13,17,18,20 The assay proved to be adequate for establishing pharmacokinetic parameters in all samples evaluated.…”

“…Cass and collaborators have reported on the preparation and application of a RAM BSA column coupled to a chiral polysaccharide column phase for the analysis of pantoprazole and omeprazole enantiomers 17,18 and for the determination of metyrapol enantiomers and metyrapone 13 by achiral-chiral chromatography in human plasma.…”