Development and use of a triplex real-time PCR assay for detection of three DNA viruses in psittacine birds

Abstract

Aves polyomavirus 1, psittacine beak and feather disease virus, and psittacid herpesvirus 1 are important pathogens of psittacine birds with the potential to cause substantial morbidity and mortality. Using publically available nucleotide sequences, we developed and validated a triplex real-time PCR (rtPCR) assay to rapidly detect these 3 viruses. The assay had high analytical sensitivity, detecting <6 copies of viral DNA per reaction, and 100% analytical specificity, showing no cross-reactivity with 59 other animal pathogens. Archived formalin-fixed, paraffin-embedded tissues from psittacine birds diagnosed at postmortem as infected with each of the viruses as well as virus-negative birds were used to validate the utility of the assay. Birds were selected for the positive cohort if they showed histologic evidence of infection (i.e., characteristic inclusion bodies in tissues); birds in the negative cohort had final diagnoses unrelated to the pathogens of interest. The triplex rtPCR assay confirmed 98% of histopathology-positive cases, and also identified subclinical infections that were not observed by histologic examination, including coinfections. Birds that tested positive only by rtPCR had significantly higher cycle threshold values compared to those with histologic evidence of infection. Positive, negative, and overall percentage agreements as well as the kappa statistic between the results of the assay and histopathology were high, demonstrating the usefulness of the assay as a tool to confirm disease diagnoses, and to improve detection of subclinical infections.

Infecção por circovírus em psitacídeos

“…O circovírus pode promover quadros de imunossupressão nas aves e facilitar a ocorrência de infecções secundárias (Phalen, 2006), de origem bacteriana ou viral, tais como Chlamydia psittaci (Sutherland et al, 2019), Pseudomonas aeruginosa (Doneley, 2003) e poliomavírus, respectivamente (Schmidt et al, 2003;Bert et al, 2005;Phalen, 2006;Gibson et al, 2019). A presença de necrose irregular em células reticulares do baço, da bolsa cloacal e do timo (Phalen, 2006), indicam uma condição de imunossupressão permanente (Gerlach, 1994), que comumente resulta no óbito devido a presença de infecções secundárias (Bert et al, 2005;Adiguzel et al, 2020).…”

“…Em relação às alterações anatomopatológicas, as principais lesões encontradas estão relacionadas às alterações nas penas e, em menor ocorrência, no bico (Pass e Perry, 1984;Raidal et al, 1993;Schmidt et al, 2003). O circovírus promove depleção linfoide no timo e na bolsa cloacal, com inclusão típica (Gibson et al, 2019). Em aves jovens, o timo e a bolsa cloacal podem estar atrofiados e com tecido necrótico, enquanto que, em aves adultas, o mesmo ocorre em tecidos linfoides secundários, como o baço (Gerlach, 1994).…”

“…Observa-se a presença de diversas inclusões intracitoplasmáticas dentro de macrófagos (Pass e Perry, 1984;Latimer et al, 1991). É importante ressaltar que as lesões decorrentes de infecções secundárias devem ser consideradas devido ao quadro imunossupressor (Bert et al, 2005;Gibson et al, 2019).…”

“…Tem como principal característica causar problemas diversos no empenamento das aves, que variam de penas distróficas à completa apteria. Além disso, o vírus afeta o sistema imune, o que potencializa a ocorrência de infecções secundárias nas aves acometidas (Bert et al, 2005;Gibson et al, 2019).…”